[发明专利]一种PMP-HPLC法在园参与林下参鉴别中的应用

权利要求书

1.一种鉴别园参与林下参的方法，采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化-高效液相色谱PMP-HPLC，包括样品制备、样品分析和样品鉴定，其特征在于：通过水提醇沉的方法制备人参样品；再采用PMP对人参样品进行衍生化，得到供试品；通过HPLC测定供试品中半乳糖Gal和阿拉伯糖Ara的含量；建立标准模式限定范围，用来鉴别未知样品；

所述制备人参样品的方法为下列(1)或(2)之一的制备方法：

(1)按照常规方法将干燥人参切成小块的试样称定后，加入纯水，煎煮提取2次，每次2小时，过滤，浓缩，加入乙醇沉淀，离心，取沉淀干燥，即得鉴别样品；

(2)按照常规方法将干燥人参切成小块的试样称定后，加入80％乙醇回流2次，每次2小时，人参药渣加纯水，煎煮提取2次，每次2小时，过滤，浓缩，加乙醇沉淀，取沉淀干燥，即得鉴别样品。

2.如权利要求1所述鉴别园参与林下参的方法，其特征在于样品PMP衍生化供试品的制备方法为：精密称取鉴别样品20mg，加2mol/L三氟乙酸TFA于100℃水解8h，吹干后加入纯水10mL溶解，即得水解液；加0.5mol/LPMP甲醇溶液6mL，加0.3mol/L氢氧化钠溶液5mL，50℃水浴反应0.5h，加0.3mol/L盐酸溶液5mL中和，用等体积三氯甲烷萃取3次，取水层放置过夜，即得鉴别样品PMP衍生化供试品。

3.如权利要求1所述鉴别园参与林下参的方法，其特征在于HPLC法对PMP衍生化供试品进行分析的方法为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱C18，4.6mm×250mm，5μm；流动相A是PH6.8为磷酸盐缓冲液：乙腈＝85:15，v/v；流动相B是PH为6.8的磷酸盐缓冲液：乙腈＝60:40，v/v；流速为0.9mL/min；检测波长为250nm；进样量为10μL；梯度洗脱步骤如下：

4.如权利要求1所述鉴别园参与林下参的方法，其特征在于所述的建立标准模式限定范围，其特征是：按2015版《中国药典》通则0512高效液相色谱HPLC法测定，记录色谱图，测量对照品和供试品中Gal、Ara成分的峰面积，按下式计算鉴别样品中单糖的含量Wx；

式中：W_X为鉴定样品中单糖的含量mg/g；

A_X为鉴定样品中单糖的峰面积μV·min；

AR为对照品的峰面积μV·min；

CR为对照品的浓度mg/mL；

V样为鉴定样品溶液的定容体积mL；

m样为鉴定样品的质量mg。

5.如权利要求1所述鉴别园参与林下参的方法，其特征在于所建立的标准模式限定范围，其特征是：Gal、Ara标准模式限定范围为：

园参为整体人参，包括芦头、主根、侧根、须根：

Gal含量范围：10.00～28.00mg/g；

Ara含量范围：10.00～45.00mg/g；

林下参为整体人参，包括芦头、主根、侧根、须根：

Gal含量范围：28.00～100.00mg/g；

Ara含量范围：45.00～120.00mg/g。

6.如权利要求5所述的鉴别园参与林下参的方法，其特征在于在样品鉴别时，所选择PMP-HPLC图谱中的Gal、Ara色谱峰，为园参与林下参样品所共有；图谱中Gal、Ara的含量均应符合园参和林下参所规定的标准模式范围。