[发明专利]一种PMP-HPLC法在园参与林下参鉴别中的应用

说明书

本发明依据富含半乳糖和阿拉伯糖的伸展蛋白普遍存在于植物细胞壁并随生长年限变化的特点，提供了一种通过PMP‑HPLC法测定园参与林下参中半乳糖和阿拉伯糖的含量，并将二者的测量值与标准模版范围比较进行的鉴别方法。涉及园参与林下参中糖类成分的提取方法以及半乳糖和阿拉伯糖的含量测定，并设置了园参与林下参中2种单糖含量的限定标准模式范围，属于中药材检测技术领域。

技术领域

本发明涉及园参及林下参的鉴别方法，具体涉及利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化-高效液相色谱(PMP-HPLC)法对园参及林下参的鉴别方法，是一种简单、快速、准确的鉴别方法，涉及中药材检测技术领域。

背景技术

人参Panax ginseng C.A.Mey，为五加科多年生植物，干燥根入药。人参药材市场上主要分野生人参、林下参、园参，从植物学上为同一种源。其中，林下参的定义为：播种后，自然生长于深山密林15年以上的人参，由人工将野山参种子播种于林下，没有人为因素，既不移动，又不经任何管理，长期自然生长而成；主要分布在长白山原始森林和大小兴安岭森林中；在野生人参资源日益紧缺甚至濒临灭绝的情况下，这种仿野生栽培的林下参在国内外受到了一致的认可。园参的定义为：经过人工栽植培育而长成的人参，全人工管理下生长发育，培育达5～6年后采收的人参；主要分布在山林坡地，人工制成的参床上。《中国药典》(2015年版一部)中收载了人参(园参)和林下参；《国家卫生部保健食品药食同源原料》中收载的为人参(园参)。

人参因生长年限和环境不同，其各类成分存在差异。从古自今，人们公认，人参生长年限越长，其人参的质量及其有效物质含量越高。一直以来，人们对于人参真伪优劣的鉴别方法上，主要是以人参整体外表形状特征作为依据。近年来，研究者在人参中常见总皂苷含量(一种用近红外光谱技术识别不同生长方式人参及对人参中组分含量测定的方法，专利，CN201410011440)、腺苷含量(林下山参与园参中腺苷和人参皂苷含量比较分析，何绍玉等，药物分析杂志，2010，30 (9)1701-1706)、木质素含量(人参木质素量与生长年份关系的研究，李靖等，中草药，2007年，38卷，第一期，105-108)以及挥发油种类(林下参与栽培人参的微量化学鉴别方法，专利，CN200510030084.4)的差异研究等方面做了深入探讨，目的都是要寻找一种园参和林下参的鉴别方法和依据。但在以上的研究中，园参与林下参二者之间的差异并不十分明显，这就需要提出一种有充分依据且效果明显的方法来简单、快速、准确地鉴别园参和林下参。

伸展蛋白是植物细胞壁中的主要蛋白质成分，也称为伸展糖蛋白，它普遍存在于各种植物的细胞壁中。伸展糖蛋白中的糖部分组成主要是半乳糖(Gal)和阿拉伯糖(Ara)，含量为糖蛋白的60％左右。相关文献报道表明，植物在生长旺盛的幼龄期的细胞壁中伸展蛋白含量少，但随着生长速度的迟缓时，伸展蛋白含量明显增加。因此，本发明可通过对人参中Gal和Ara的含量测定值来鉴别园参和林下参。

近年来，在中药材的化学成分研究过程中，越来越重视大分子多糖类成分的信息，并建立与多糖相关的质量控制方法与标准。高效液相色谱法对于PMP衍生化的单糖具有分离效能高，且方法稳定、简便快速，可作为大分子糖类组成的鉴别技术。以PMP-HPLC法建立的单糖组成特征图谱，可有效控制原料药材和制剂质量。本发明利用PMP-HPLC法，通过色谱峰的峰面积来计算Gal和Ara 在人参样品(鉴别样品)中的含量，并限定标准模式范围，从而有效鉴别园参与林下参。

发明内容

本发明提供了一种以PMP-HPLC图谱中Gal和Ara的峰面积计算鉴别样品中2种单糖的含量，与标准模式限定范围比较，鉴别园参或林下参的方法。

本发明所述的人参样品涉及园参、林下参。

本发明所述的定量成分包括人参中的半乳糖(Gal)和阿拉伯糖(Ara)。

本发明技术路线如下：

1.样品的制备：