[发明专利]一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法有效
| 申请号： | 201910004718.0 | 申请日： | 2019-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN109628364B | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 张娟;杨佩珊;刘为佳;朱政明;陈坚;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/31;C12R1/01 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 乳酸菌 酸性 条件 耐受 能力 方法 | ||
1.一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法，其特征在于，所述方法为以乳酸菌为宿主，过量表达微生物细胞膜上用于转运谷氨酰胺的谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP和/或微生物细胞膜上用于转运谷氨酸和天冬氨酸的谷氨酰胺转运ATP结合蛋白GlnQ；编码所述谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述谷氨酰胺转运ATP结合蛋白GlnQ的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述乳酸菌为乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000。
2.如权利要求1所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法，其特征在于，所述过量表达为先将编码谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP和/或谷氨酰胺转运ATP结合蛋白GlnQ的基因与表达载体构建含有编码谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP和/或谷氨酰胺转运ATP结合蛋白GlnQ的基因的重组质粒，再将重组质粒导入乳酸菌中。
3.如权利要求2所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法，其特征在于，所述表达载体为pNZ8148载体。
4.如权利要求3所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法，其特征在于，所述表达载体为pNZ8148载体时，构建含有编码谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP的基因的重组质粒的方法为先以Lactococcus lactis NZ9000的基因组为模板，分别以核苷酸序列如SEQ IDNO.5、SEQ ID NO.6所示的基因片段为引物，通过PCR扩增获得核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因片段，然后将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因片段与pNZ8148载体通过限制性内切酶进行双酶切得到酶切产物，最后将得到的酶切产物进行连接，得到含有编码谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP的基因的重组质粒。
5.如权利要求4所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法，其特征在于，所述构建含有编码谷氨酰胺ABC转运蛋白GlnP的基因的重组质粒时，使用的限制性内切酶为Nco I以及Xba I。
6.如权利要求3所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法，其特征在于，所述表达载体为pNZ8148载体时，构建含有编码谷氨酰胺转运ATP结合蛋白GlnQ的基因的重组质粒的方法为先以Lactococcus lactis NZ9000的基因组为模板，分别以核苷酸序列如SEQID NO.7、SEQ ID NO.8所示的基因片段为引物，通过PCR扩增获得核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的基因片段，然后将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的基因片段与pNZ8148载体通过限制性内切酶进行双酶切得到酶切产物，最后将得到的酶切产物进行连接，得到含有编码谷氨酰胺转运ATP结合蛋白GlnQ的基因的重组质粒。
7.利用权利要求1-6任一所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法制备得到的酸胁迫抗性提高的乳酸菌。
8.权利要求1-6任一所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法在提高乳酸菌酸胁迫抗性方面的应用。
9.权利要求1-6任一所述的一种提高乳酸菌对酸性条件的耐受能力的方法或权利要求7所述的制备得到的酸胁迫抗性提高的乳酸菌在制备食品、药品、饲料以及化学品方面的应用。
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