[发明专利]一种黑小麦麸皮中花色苷的高效液相色谱检测方法

说明书

一种黑小麦麸皮中花色苷的高效液相色谱检测方法，包括黑小麦麸皮中花色苷的提取、标准曲线的绘制和高效液相测定。高效液相测定时的色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：A为乙腈，B为0.2％甲酸水溶液；检测波长：525nm；柱温：25℃；进样量：10μL，进行梯度洗脱。比较样品和标准品的高效液相色谱图，依组份保留时间进行定性分析，与标准品的高效液相色谱图中相同时间的峰面积与标准曲线比较进行定量分析。本发明方法简单，测定结果准确、灵敏、重现性好。线性试验结果表明，在一定浓度范围内，花色苷标准曲线呈极显著正相关，近似于线性关系(R²≥0.99)。

技术领域

本发明涉及一种黑小麦麸皮中花色苷的高效液相色谱检测方法，属于化学分析检测技术领域。

背景技术

黑粒小麦因其种皮及糊粉层富含天然花色苷类化合物而呈现黑色，所含有的天然花色苷在促进人类身体健康和预防心血管疾病方面有重要作用，是珍贵的种质资源。

花青素为彩粒小麦中的主要黄酮类物质，在自然状态下常与各种糖结合形成糖苷，称为花色苷。花色苷作为一种天然色素，具有一定的营养和药理作用，在食品、化妆品、医药、保健等方面有着巨大的应用潜力。大量研究结果表明，花色苷具有抗氧化，抗癌，抗炎症，预防心血管疾病等多种生理功能。然而，由于花色苷类色素的成分极其复杂多样，目前，这类色素的质量标准依旧采用分光光度计测定色素色价的方法，已经无法满足对色素成分定量分析的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黑小麦麸皮中花色苷的高效液相色谱检测方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种黑小麦麸皮中花色苷的高效液相色谱检测方法，包括下列步骤：

步骤1、黑小麦麸皮中花色苷的提取

将黑小麦麸皮加入酸化甲醇提取剂中，超声提取15-25min，然后对提取液进行离心，得到上清液；

步骤2、标准曲线的绘制

S1、将矢车菊-3,0-葡萄糖苷作为标准对照品，加入至体积分数为70％的甲醇溶液中溶解，定容后即得标准对照品储备液，放入-20℃冰箱中冷藏，备用；

S2、然后将所述标准对照品储备液稀释不同倍数，用高效液相法，在波长525nm下测定其吸收峰，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线；

步骤3、高效液相测定

色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：A为乙腈，B为体积分数为0.2％的甲酸水溶液；检测波长：525nm；柱温：25℃；进样量：10μL，进行梯度洗脱；将上清液用 0.22μm滤膜过滤，然后注入高效液相色谱仪，比较样品和标准品的高效液相色谱图，依组份保留时间进行定性分析，与标准品的高效液相色谱图中相同时间的峰面积与标准曲线比较进行定量分析；

按公式(1)计算黑小麦麸皮中矢车菊-3,0-葡萄糖苷含量；

公式(1)中，ω为花色苷质量分数，单位为mg/g；p为测定的花色苷浓度，单位为mg/mL； V为样品提取液的体积，单位为mL；m为样品总质量，单位为g。

优选的技术方案为：所述酸化甲醇提取液的体积分数为70％，由甲醇、盐酸和水按照体积比70：0.5：29.5混合后制得；所述盐酸的体积分数为36％。

优选的技术方案为：所述梯度洗脱方法如下表：