[发明专利]一种pH敏感的肿瘤靶向的重组高密度脂蛋白、制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种pH敏感的肿瘤靶向的重组高密度脂蛋白，含如下重量份组分：1～5份抗肿瘤药物，15～35份磷脂，15～60份白蛋白，1～10份胆固醇衍生物，2～6份亚油酸。组分中pH敏感的胆固醇衍生物有效保证了rHDL在血液循环输送过程中的结构稳定性，提高了抗肿瘤药物向肿瘤组织靶向输送的效率，rHDL被肿瘤细胞摄取后，pH敏感的胆固醇衍生物中的缩醛键水解为原本的胆固醇，满足了胞内ACAT酶的催化条件，借由脂蛋白结构发生变化进而实现了抗肿瘤药物在肿瘤细胞内部的快速释放，有效地杀伤肿瘤细胞，是一种发展潜力巨大的肿瘤靶向载体，解决了现有技术抗肿瘤药物的生物利用度低和肿瘤杀伤选择性低的问题。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种pH敏感的肿瘤靶向的重组高密度脂蛋白及制备方法。

背景技术

目前，抗肿瘤药物特别是脂溶性抗肿瘤药物普遍存在生物利用度低和肿瘤杀伤选择性低等问题，例如，紫杉醇和阿霉素，尽管其具有良好的抗肿瘤活性，但在水中的溶解度低(＜0.03g/L)，作用面广，特异性弱，毒副作用较强，故而其口服制剂和注射制剂在临床应用中遇到了生物利用度低和肿瘤杀伤选择性低等问题，所以临床治疗急需一种有效方法提高脂溶性抗肿瘤药物溶解度并减少抗肿瘤药物的毒副作用，增加抗肿瘤药物的肿瘤杀伤效果。

高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)是由载脂蛋白、游离胆固醇、磷脂以及非极性的脂质组成的天然生物活性物质，基于仿生学设计的重组高密度脂蛋白(reconstituted high density lipoprotein，rHDL)是采用天然HDL的脂质与蛋白成分和接近的比例重组的载药系统，其在克服天然HDL来源稀缺、制备繁琐、无法大规模应用等缺点的同时，更是因为其独特的亲水-疏水结构、较大的脂质核心(可作为脂溶性药物的贮存空间)、内源性可完全降解以及不被网状内皮系统识别和清除，并可借助其主要载脂蛋白-载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I，apoA-I)为肿瘤细胞所摄取等特性，在提高药物向肿瘤组织靶向分布、增加药效等方面显示出独特的优势。

天然HDL在体内具有新生盘状和成熟球状两种形态，其脂核结构恰好与药剂学中脂质体和脂质纳米粒相似，在脂核表面孵育载脂蛋白制备的rHDL即可重现天然HDL相似的结构和生理功能。考虑apoA-I受体在人体内广泛分布，靶向特异性较差，且来源稀少，获取较难，因此采用了肿瘤靶向性(通过增加跨内皮gp-60介导的转运和增加与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白的相互作用)更为突出的白蛋白代替apoA-I构建rHDL。

新生盘状HDL在进入血液循环后，会被血液中大量存在的卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶(Lecithin-cholesterol acyltransferase，LCAT)催化变构为成熟球状的HDL，这一次过程称之为天然HDL的变构过程。如果盘状rHDL经历相同变构过程，其脂核包载的药物则会大量泄漏，降低rHDL向肿瘤部位靶向输送的效率。变构过程导致药物泄露主要涉及两个反应底物，其中之一即为胆固醇上的羟基，为避免rHDL在血液巡行过程中遭受LCAT酶的催化解构，可以通过化学修饰手段，使用胆固醇和正丁醛(或正己醛、PEG2000醛)反应生成的胆固醇缩醛化衍生物代替胆固醇构建载体，由于缩醛键的保护作用，盘状rHDL在血液循环时程中能够抵御LCAT酶对原本胆固醇羟基的催化进攻，切实提高载体的酶促变构稳定性，一定程度降低载体靶向输送至肿瘤组织之前的药物泄露。

细胞内脂质代谢则是由酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶(Acyl coenzyme A-cholesterol acyltransferase，ACAT)调节的，当盘状rHDL完成在血液中的巡行过程输送至肿瘤组织微酸性环境(酸性条件pH5.0～6.5)后缩醛键可以水解释放出胆固醇，此时肿瘤细胞内ACAT酶可对盘状rHDL产生类似于血浆中LCAT酶的催化变构过程，伴随变构过程发生的药物泄漏现象，则成为有效肿瘤细胞内部药物释放。另外，肿瘤组织微环境为弱酸性(pH5.0-6.5)，因此，利用其比正常组织低的特性，可以构建pH敏感的rHDL，使得其可以在中性及碱性环境下稳定，而在偏酸性的环境下完成突释，实现智能的药物的控制释放。现有技术中目前没有这方面的报道。