[发明专利]一种骨髓细胞培养基在审
申请号: | 201910009761.6 | 申请日: | 2019-01-05 |
公开(公告)号: | CN111411074A | 公开(公告)日: | 2020-07-14 |
发明(设计)人: | 张海峰;彭昉;俞英豪;张孝松;陆诚 | 申请(专利权)人: | 杭州可典生物科技有限公司;杭州中赢生物医疗科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077;G01N1/28 |
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地址: | 310012 浙江省杭州市*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 骨髓细胞 培养基 | ||
1.一种骨髓细胞培养基,其特征在于,所述培养基由RPMI-1640基础培养基、血清、抗生素组成。
2.如权利要求1所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述骨髓细胞培养基还含有谷氨酰胺。
3.如权利要求1或2所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述血清为胎牛血清或固体血清替代物,优选为固体血清替代物。
4.如权利要求2或3所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述谷氨酰胺的浓度为1-4mmol/L,优选为3mmol/L。
5.如权利要求3或4所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述固体血清替代物的浓度为0.5-2g/L,优选地,固体血清替代物的浓度为1g/L。
6.如权利要求1-5任一所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述抗生素为青霉素和/或链霉素,所述青霉素和/或链霉素的浓度为50-100ug/ml。
7.一种染色体制片的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)提供一种骨髓细胞培养基,并向其中接种骨髓细胞穿刺液;
2)培养步骤1)所述的接种有骨髓细胞穿刺液的骨髓细胞培养基;
3)向步骤2)的骨髓细胞培养基中加入秋水仙胺终止培养;
4)对步骤3)终止培养的骨髓细胞进行离心处理,去除上清收集细胞;
5)对步骤4)所收集细胞进行低渗处理;
6)对步骤5)低渗处理后的骨髓细胞进行离心处理,去除上清收集细胞
7)向步骤6收集细胞中加入固定液,进行固定处理,得到细胞悬液;
8)重复步骤6)和7);
9)对步骤8)固定处理后的细胞悬液滴至载玻片晾干;
10)对步骤9)晾干后的细胞染色处理并做染色体核型分析。
8.如权利要求7所述的染色体制片方法,其特征在于,所述骨髓细胞培养基含有RPMI-1640基础培养基、血清、抗生素;优选地,所述骨髓细胞培养基含有RPMI-1640基础培养基、血清、抗生素、谷氨酰胺;
所述血清为胎牛血清或固体血清替代物,优选为固体血清替代物,所述固体血清替代物的浓度为0.5-2g/L,优选地,固体血清替代物的浓度为1g/L;
所述谷氨酰胺的浓度为1-4mmol/L,优选为3mmol/L;
所述抗生素为青霉素和/或链霉素,所述青霉素和/或链霉素的浓度为50-100ug/ml。
9.如权利要求7或8所述的染色体制片方法,其特征在于,步骤2)为在二氧化碳培养箱中进行培养,培养时间为24-100小时,进一步优选地,培养时间为40-90小时,更优选地,培养时间为50-80小时,最优选地,培养时间为72小时;
步骤3)中加入秋水仙胺的终浓度为0.05-0.2ug/ml,最优选地,加入秋水仙胺的终浓度为0.1ug/ml;加入秋水仙胺终止培养的时间为5-60分钟,进一步优选地,加入秋水仙胺终止培养的时间为10-40分钟,最优选地,加入秋水仙胺终止培养的时间为15-30分钟;
步骤5)中进行低渗处理的溶液为KCL溶液,KCL溶液的浓度为0.05-0.1M,最优选地,KCL溶液的浓度为0.075M;
步骤6)中固定处理的固定液为醋酸与甲醇混合液,优选地,固定液醋酸与甲醇的体积比为3:1;
步骤10)中染色处理的染色液为Giemsa染料。
10.权利要求1-6任一所述骨髓细胞培养基在骨髓染色体制片中的应用。
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