[发明专利]一种骨髓细胞培养基在审

专利信息
申请号: 201910009761.6 申请日: 2019-01-05
公开(公告)号: CN111411074A 公开(公告)日: 2020-07-14
发明(设计)人: 张海峰;彭昉;俞英豪;张孝松;陆诚 申请(专利权)人: 杭州可典生物科技有限公司;杭州中赢生物医疗科技有限公司
主分类号: C12N5/077 分类号: C12N5/077;G01N1/28
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 310012 浙江省杭州市*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 一种 骨髓细胞 培养基
【权利要求书】:

1.一种骨髓细胞培养基,其特征在于,所述培养基由RPMI-1640基础培养基、血清、抗生素组成。

2.如权利要求1所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述骨髓细胞培养基还含有谷氨酰胺。

3.如权利要求1或2所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述血清为胎牛血清或固体血清替代物,优选为固体血清替代物。

4.如权利要求2或3所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述谷氨酰胺的浓度为1-4mmol/L,优选为3mmol/L。

5.如权利要求3或4所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述固体血清替代物的浓度为0.5-2g/L,优选地,固体血清替代物的浓度为1g/L。

6.如权利要求1-5任一所述的骨髓细胞培养基,其特征在于,所述抗生素为青霉素和/或链霉素,所述青霉素和/或链霉素的浓度为50-100ug/ml。

7.一种染色体制片的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)提供一种骨髓细胞培养基,并向其中接种骨髓细胞穿刺液;

2)培养步骤1)所述的接种有骨髓细胞穿刺液的骨髓细胞培养基;

3)向步骤2)的骨髓细胞培养基中加入秋水仙胺终止培养;

4)对步骤3)终止培养的骨髓细胞进行离心处理,去除上清收集细胞;

5)对步骤4)所收集细胞进行低渗处理;

6)对步骤5)低渗处理后的骨髓细胞进行离心处理,去除上清收集细胞

7)向步骤6收集细胞中加入固定液,进行固定处理,得到细胞悬液;

8)重复步骤6)和7);

9)对步骤8)固定处理后的细胞悬液滴至载玻片晾干;

10)对步骤9)晾干后的细胞染色处理并做染色体核型分析。

8.如权利要求7所述的染色体制片方法,其特征在于,所述骨髓细胞培养基含有RPMI-1640基础培养基、血清、抗生素;优选地,所述骨髓细胞培养基含有RPMI-1640基础培养基、血清、抗生素、谷氨酰胺;

所述血清为胎牛血清或固体血清替代物,优选为固体血清替代物,所述固体血清替代物的浓度为0.5-2g/L,优选地,固体血清替代物的浓度为1g/L;

所述谷氨酰胺的浓度为1-4mmol/L,优选为3mmol/L;

所述抗生素为青霉素和/或链霉素,所述青霉素和/或链霉素的浓度为50-100ug/ml。

9.如权利要求7或8所述的染色体制片方法,其特征在于,步骤2)为在二氧化碳培养箱中进行培养,培养时间为24-100小时,进一步优选地,培养时间为40-90小时,更优选地,培养时间为50-80小时,最优选地,培养时间为72小时;

步骤3)中加入秋水仙胺的终浓度为0.05-0.2ug/ml,最优选地,加入秋水仙胺的终浓度为0.1ug/ml;加入秋水仙胺终止培养的时间为5-60分钟,进一步优选地,加入秋水仙胺终止培养的时间为10-40分钟,最优选地,加入秋水仙胺终止培养的时间为15-30分钟;

步骤5)中进行低渗处理的溶液为KCL溶液,KCL溶液的浓度为0.05-0.1M,最优选地,KCL溶液的浓度为0.075M;

步骤6)中固定处理的固定液为醋酸与甲醇混合液,优选地,固定液醋酸与甲醇的体积比为3:1;

步骤10)中染色处理的染色液为Giemsa染料。

10.权利要求1-6任一所述骨髓细胞培养基在骨髓染色体制片中的应用。

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