[发明专利]一种基于声致微流的冷冻防护剂导入去除微系统和方法、及细胞的低温保存方法

权利要求书

1.一种基于声致微流的冷冻防护剂导入去除方法，包括以下步骤：

(1)提供基于声致微流的冷冻防护剂导入去除微系统，所述冷冻防护剂导入去除微系统包含声表面波器件；

(2)采用滴管或者微流控器件将冷冻防护剂和含有细胞的细胞培养液导入到所述声表面波器件上的疏水表面区域；

(3)用低于+34dBm的功率驱动所述声表面波器件，所述声表面波器件产生声表面波，在所述声表面波的驱动下，所述冷冻防护剂与所述细胞培养液混合均匀，在细胞内外冷冻防护剂的浓度差引起的扩散作用下，完成冷冻防护剂与胞内水的置换，实现将冷冻防护剂导入细胞或将冷冻防护剂从细胞中去除。

2.如权利要求1所述的基于声致微流的冷冻防护剂导入去除方法，其特征在于，步骤(3)中，控制+27dBm～+34dBm的功率驱动所述声表面波器件。

3.如权利要求1所述的基于声致微流的冷冻防护剂导入去除方法，其特征在于，所述声表面波器件包括压电衬底、至少一个叉指换能器，其中，所述至少一个叉指换能器制备在所述压电衬底表面。

4.如权利要求1所述的基于声致微流的冷冻防护剂导入去除方法，其特征在于，所述声表面波器件工作时的表面温度最大为37℃。

5.一种细胞的低温保存方法，包括以下步骤：

(1)利用如权利要求1～4任一项所述的冷冻防护剂导入去除方法将冷冻防护剂导入到细胞中；

(2)对导入了冷冻防护剂的细胞进行液氮冷冻；

(3)对液氮冷冻的细胞进行水浴解冻；

(4)利用如权利要求1～4任一项所述的冷冻防护剂导入去除方法将水浴解冻的细胞进行处理，将细胞中的冷冻防护剂去除。

6.如权利要求5所述的细胞的低温保存方法，其特征在于，步骤(1)具体包括：

(1-1)配置具有浓度差的至少2种浓度的冷冻防护剂；

(1-2)将最低浓度的冷冻防护剂和含有细胞的细胞培养液通过滴管或微流控器件导入到所述声表面波器件的疏水表面区域，用低于+34dBm的功率驱动所述声表面波器件，在声表面波的驱动下，最低浓度的冷冻防护剂与细胞培养液混合均匀，在8～12s声致微流的作用下，细胞内外的冷冻防护剂浓度达到平衡，实现将最低浓度的冷冻防护剂导入到细胞内；

(1-3)按照浓度由低到高，利用步骤(1-2)的方法，依次将不同浓度的冷冻防护剂导入到细胞内，直至细胞内的冷冻防护剂达到目标浓度。

7.如权利要求5所述的细胞的低温保存方法，其特征在于，步骤(4)具体包括：

(4-1)配置具有浓度差的至少3种浓度的冷冻防护剂；

(4-2)将最高浓度的冷冻防护剂和水浴解冻的细胞培养液通过滴管或微流控器件导入到所述声表面波器件的疏水表面区域，用低于+34dBm的功率驱动所述声表面波器件，在声表面波的驱动下，最高浓度的冷冻防护剂与细胞培养液混合均匀，在8～12s声致微流的作用下，细胞内外的冷冻防护剂浓度达到平衡，以稀释细胞内的冷冻防护剂；

(4-3)按照浓度由高到低，利用步骤(4-2)的方法，依次利用不同浓度的冷冻防护剂稀释细胞内的冷冻防护剂，直到将细胞内的冷冻防护剂彻底去除。