[发明专利]一种重组病毒样颗粒及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种重组病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

将表达重组病毒衣壳蛋白的细胞进行发酵后收集发酵产物，采用2-6M的脲溶液溶解解聚，胞外二次组装得到重组病毒衣壳蛋白的完整病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组病毒衣壳蛋白包括重组乙肝病毒核心抗原；

优选地，所述重组乙肝病毒核心抗原包括重组乙肝病毒核心抗原的截短体和/或含有其他抗原的重组乙肝病毒核心抗原全长；

优选地，所述截短体与其他抗原融合表达；

优选地，所述重组乙肝病毒核心抗原全长与其他抗原融合表达；

优选地，所述重组使用的重组蛋白表达系统包括真核表达系统和/或原核表达系统；

优选地，所述真核表达系统包括非洲爪蟾蛙卵母细胞、植物本氏烟或毕赤酵母中的任一种或至少两种的组合；

优选地，所述原核表达系统包括大肠杆菌。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述脲溶液的浓度为3.5-4.5M，优选为4M；

优选地，所述脲溶液的pH值为7.0-9.0。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述收集发酵产物具体包括如下步骤：

(1)破碎细胞，离心收集上清；

(2)上清中加入硫酸铵溶液，搅拌，离心收取沉淀，得到所述发酵产物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述破碎细胞的方式包括超声破碎和/或高压匀浆；

优选地，步骤(2)所述的硫酸铵溶液终浓度为0.05-4M，优选为0.1-1M；

优选地，步骤(2)所述的硫酸铵溶液pH值为7.0-8.0；

优选地，步骤(2)所述搅拌的温度为1-6℃，优选为4℃。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述胞外二次组装包括如下步骤：

(1’)纯化解聚后的组装单元；

(2’)透析降低脲浓度，调节组装缓冲溶液的pH值、离子强度、蛋白质浓度、温度和时间，通过胞外组装得到重组病毒衣壳蛋白的完整病毒样颗粒。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1’)所述纯化的方法包括亲和层析、离子交换或凝胶过滤，优选为亲和层析；

优选地，所述亲和层析的介质包括镍离子金属螯合亲和层析介质和肝素亲和层析介质；

优选地，步骤(2’)所述降低脲浓度采用梯度透析的方式；

优选地，所述梯度透析具体包括如下步骤：将步骤(1’)得到的解聚后的样品透析至Tris透析缓冲液中，再透析至组装缓冲液中；

优选地，所述Tris透析缓冲液包括Tris-HCl和脲；

优选地，所述Tris透析缓冲液中的脲的终浓度不大于2M；

优选地，所述Tris透析缓冲液的pH值为8.0-9.0；

优选地，步骤(2’)所述组装缓冲液包括Tris-HCl；

优选地，所述组装缓冲液还包括NaCl；

优选地，所述NaCl的终浓度为0.2-1.5M，优选为0.5M；

优选地，步骤(2’)所述组装缓冲液的pH值为7.0-8.0，优选为7.4；

优选地，步骤(2’)所述蛋白质浓度为0.8μM-500μM，优选为0.8-100μM；

优选地，步骤(2’)所述温度为1-6℃，优选为4℃；

优选地，步骤(2’)所述时间不少于24h，优选为24h-3天。