[发明专利]一种马桑香菇液体菌种的制备方法

权利要求书

1.一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)采用组织分离或孢子分离方法，在无菌条件下从马桑香菇子实体中提取菌种，接种于试管培养基上，18～22℃培养18～22d得到试管母种；

(2)将步骤(1)获得的试管母种，在无菌条件下接种到含有一级液体培养基的三角瓶内；18～22℃静置48～72h；将静置后的三角瓶放在振荡器上，振荡培养48～72h，获得一级液体菌种；

(3)将步骤(2)获得的一级液体菌种按3～5％的接种量，在无菌条件下接种到压力为0.04MPa，含有二级液体培养基的发酵罐中，利用无菌通道，对发酵罐内加气供氧，在18～20℃条件下发酵培养48～72h，获得二级液体菌种；

(4)将步骤(3)获得的二级液体菌种，在无菌条件下接出至含有二级液体培养基的接菌桶内，备用。

2.根据权利要求1所述的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述1L试管培养基的组成如下：马铃薯100g、小麦40g、葡萄糖10g、红糖15g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1.5g、琼脂粉20g、维生素B10.1g和维生素B20.05g。

3.根据权利要求2所述的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述试管培养基的制备方法如下：将权利要求2所述重量的马铃薯和小麦分别用水煮沸20min，静置，用纱布过滤，过滤后的滤液混合；将其余营养物加入滤液，边煮边搅拌，煮8～10min后获得试管培养基。

4.根据权利要求1所述的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述1L一级液体培养基的组成如下：马铃薯100g、小麦40g、葡萄糖10g、红糖15g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1.5g、琼脂粉20g和维生素B10.1g。

5.根据权利要求1所述的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，步骤(2)在接种前，在无菌条件下，用接种针去除靠近试管口一端1.3～1.5cm的培养基，将剩余培养基上的菌种进行切割，获得菌块，将菌块接种至三角瓶中，每个三角瓶接种5～8块。

6.根据权利要求1所述的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述1L二级液体培养基的组成如下：马铃薯50g，红糖15克，葡萄糖10克，小麦10g，蛋白胨2克，磷酸二氢钾1.8克，硫酸镁1克，维生素B10.01g。

7.根据权利要求1所述的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述无菌条件为：将蘸有75％酒精的脱脂棉缠绕在发酵罐的加菌种口处，打开加菌种口，点燃脱脂棉，在接菌种口形成无菌空间，将三角瓶中的一级液体菌种加入发酵罐。