[发明专利]一种马桑香菇液体菌种的制备方法

说明书

本发明公开了一种马桑香菇液体菌种的制备方法，包括：采用组织分离或孢子分离方法，在无菌条件下从马桑香菇子实体中提取菌种，接种于试管培养基上，得到试管母种；将试管母种，在无菌条件下接种到含有一级液体培养基的三角瓶内，振荡培养获得一级液体菌种；将一级液体菌种在无菌条件下接种到含有二级液体培养基的发酵罐中，获得二级液体菌种；将二级液体菌种，在无菌条件下接出至含有二级液体培养基的接菌桶内，备用。本发明公开的一种马桑香菇液体菌种的制备方法，与传统马桑香菇菌种制备方法相比，能够大大缩短制种时间；且在栽培接种时，具有接种快、工作效率高、菌种易存活、易渗透、易生长、菌丝发育快等优点。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，更具体的说是涉及一种马桑香菇液体菌种的制备方法。

背景技术

马桑香菇(LentinusedodesSing.)，别名马桑菌，五里香；春秋季生于马桑的枯枝上。马桑香菇是香菇属中发现的唯一生长在马桑树上的品种，目前其他香菇品种在长期的栽培过程中其香气遗传基因有所丢失，致使这些香菇品种香气不浓。马桑香菇味美清香，富含丰富的营养物质，具有很大的开发利用价值。

但是，目前关于马桑香菇液体菌种的制备方法研究较少，仍然采用传统的马桑菌菌种制备方法，培养时间长，严重制约着马桑香菇的推广和应用。

因此，提供一种马桑香菇液体菌种的制备方法，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种马桑香菇液体菌种的制备方法，大大缩短了马桑香菇的培养时间，有利于马桑香菇的广泛应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种马桑香菇液体菌种的制备方法，具体步骤如下：

(1)采用组织分离或孢子分离方法，在无菌条件下从马桑香菇子实体中提取菌种，接种于试管培养基上，18～22℃培养18～22d得到试管母种；

(2)将步骤(1)获得的试管母种，在无菌条件下接种到含有一级液体培养基的三角瓶内；18～22℃静置48～72h；将静置后的三角瓶放在振荡器上，振荡培养48～72h，获得一级液体菌种；

(3)将步骤(2)获得的一级液体菌种按3～5％的接种量，在无菌条件下接种到压力为0.04MPa，含有二级液体培养基的发酵罐中，利用无菌通道，对发酵罐内加气供氧，在18～20℃条件下发酵培养48～72h，获得二级液体菌种；

(4)将步骤(3)获得的二级液体菌种，在无菌条件下接出至含有二级液体培养基的接菌桶内，备用。

进一步，步骤(1)所述1L试管培养基的组成如下：马铃薯100g、小麦40g、葡萄糖10g、红糖15g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1.5g、琼脂粉20g、维生素B1 0.1g和维生素B2 0.05g。

进一步，步骤(1)所述试管培养基的制备方法如下：将权利要求2所述重量的马铃薯和小麦分别用水煮沸20min，静置，用纱布过滤，过滤后的滤液混合；将其余营养物加入滤液，边煮边搅拌，煮8～10min后获得试管培养基。

进一步，步骤(2)所述1L一级液体培养基的组成如下：马铃薯100g、小麦40g、葡萄糖10g、红糖15g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1.5g、琼脂粉20g和维生素B10.1g。

进一步，步骤(2)在接种前，在无菌条件下，用接种针去除靠近试管口一端1.3～1.5cm的培养基，将剩余培养基上的菌种进行切割，获得菌块，将菌块接种至三角瓶中，每个三角瓶接种5～8块。

进一步，步骤(3)所述1L二级液体培养基的组成如下：马铃薯50g，红糖15克，葡萄糖10克，小麦10g，蛋白胨2克，磷酸二氢钾1.8克，硫酸镁1克，维生素B10.01g。