[发明专利]一种抑制马克斯克鲁维酵母目的基因的表达的载体

权利要求书

1.一种载体，包括表达盒甲和表达盒乙；

所述表达盒甲依次包括如下元件：启动子甲、dCas9蛋白的编码基因、转录抑制因子和终止序列甲；

所述表达盒乙依次包括如下元件：启动子乙、sgRNA骨架结构和终止序列乙。

2.如权利要求1所述的载体，其特征在于：所述表达盒甲中，dCas9蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列6所示。

3.如权利要求1或2所述的载体，其特征在于：所述表达盒甲中还包括一个以上细胞核定位序列。

4.如权利要求1至3任一所述的载体，其特征在于：所述表达盒乙中，启动子乙和sgRNA骨架结构之间中具有单克隆位点。

5.如权利要求1至4任一所述的载体，其特征在于：所述启动子甲为ADH1启动子；所述启动子乙为KmSNR52启动子；所述终止序列甲为ADH1终止子；所述终止序列乙为SUP4终止子。

6.如权利要求1至5任一所述的载体，其特征在于：所述载体还包括表达盒丙；所述表达盒丙依次包括如下元件：启动子丙、选择标记基因和终止序列丙。

7.如权利要求1至6任一所述的载体，其特征在于：所述载体还包括特异序列；所述特异序列的功能为细胞分裂时进行自主复制。

8.X1)或X2)：

X1)权利要求1至7任一所述的载体在抑制目的基因的表达中的应用；

X2)权利要求1至7任一所述的载体在抑制酵母目的基因的表达中的应用。

9.一种抑制酵母中目的基因表达的方法，包括如下步骤：将权利要求1至7任一所述载体中表达盒乙的单克隆位点替换为sgRNA特征序列，然后转化出发酵母，筛选，得到重组酵母；所述sgRNA特征序列在出发酵母中的识别的靶标DNA为目的基因转录起始位点上游300bp至下游100bp的DNA片段；与出发酵母相比，重组酵母中目的基因的表达量降低。

10.一种抑制酵母中目的基因表达的方法，包括如下步骤：向权利要求1至7任一所述载体中的启动子乙的下游、sgRNA骨架结构的上游导入sgRNA特征序列，然后转化出发酵母，筛选，得到重组酵母；所述sgRNA特征序列在出发酵母中的识别的靶标DNA为目的基因转录起始位点上游300bp至下游100bp的DNA片段；与出发酵母相比，重组酵母中目的基因的表达量降低。