[发明专利]一种卷烟烟气TVOC与小鼠肺灌洗液中TNF-α表达的相关性分析方法

说明书

本发明涉及一种卷烟烟气TVOC与小鼠肺灌洗液中TNF‑α表达的相关性分析方法，属于生物应用技术领域。该方法包括卷烟烟气抽吸、烟气稀释、小鼠暴露、TVOC浓度测定、肺部灌洗、ELISA测试、相关性分析、判断等步骤。本发明的方法操作简单，采用小动物口鼻暴露装置，最大限度的模拟人实际抽吸情况；可选择短期或者长期暴露，对烟气对肺部的生物学效应做跟踪性调查，提供较为完整的数据跟踪；且烟气暴露浓度可控，可模拟不同抽吸量对肺部所造成的影响，为烟气对肺部生物学效应影响的科学性和准确性提供保证。

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，具体涉及一种卷烟烟气TVOC与小鼠肺灌洗液中TNF-α表达的相关性分析方法。

背景技术

卷烟烟气是一种含有颗粒物、挥发性有机物和气体的混合物。卷烟烟气中的多种成分可引起氧化应激反应，引起机体内活性氧的增加，细胞氧化/抗氧化平衡被打破，可诱导氧化应激和炎症反应，其中细胞因子TNF-α在炎症细胞的抑制和激活过程中起着重要作用。但是由于卷烟烟气的特殊性，目前大部分针对卷烟烟气对炎症因子的影响研究都是先对烟气总粒相物进行捕集，再体外测试卷烟烟气对细胞炎症因子的表达影响，不能完全模拟实际的抽吸状况，且无法准确比较不同卷烟烟气对炎症因子的影响差异及两者的相关性。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明采用小鼠口鼻暴露装置，对小鼠经过短期连续暴露，测试卷烟烟气TVOC，并对小鼠肺灌洗液中炎症因子进行检测，旨在提供一种卷烟烟气TVOC与小鼠肺灌洗液中TNF-α表达的相关性分析方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种卷烟烟气TVOC与小鼠肺灌洗液中TNF-α表达的相关性分析方法，包括如下步骤：

步骤（1），卷烟烟气抽吸：

每支烟抽吸持续时间2-5s，抽吸频率30-60s，抽吸容量35.0-50ml/2s，抽吸口数4-6口，得到卷烟烟气；

步骤（2），烟气稀释：

将步骤（1）得到的卷烟烟气与洁净空气按体积比为1:10-1:100的配比稀释混匀，后进入口鼻式暴露系统；

所述的洁净空气是空气经高效空气过滤器过滤所得；

步骤（3），小鼠暴露：

将小鼠束缚在固定筒中适应15-30min后，将装有小鼠的固定筒安装在口鼻式暴露系统上，内缸正压烟气气流进入动物鼻部，呼出气流从侧面被吸入外缸，进行卷烟烟气抽吸；每日进行一次暴露过程，持续14-28d；

步骤（4），TVOC浓度测定：

小鼠每天暴露后，在口鼻式暴露系统上进行采样，之后测量所采样品的TVOC浓度；

步骤（5），肺部灌洗：

对持续暴露14-28d后的小鼠用1ml无菌生理盐水灌注进行肺部灌洗，灌洗液离心，取上清液；

步骤（6），ELISA测试：

用ELISA方法检测上清液中TNF-α含量；

步骤（7），相关性分析：对多种牌号的卷烟采用步骤（1）~步骤（6）的发方法进行试验，然后对测得的TVOC浓度与TNF-α含量进行相关性分析；

步骤（8），判断：根据步骤（7）得到的相关性分析结果，判断除步骤（7）牌号的其它待测牌号卷烟引起TNF-α表达情况。

经本发明试验，相关性分析结果为TVOC与炎性因子TNF-α间有一定的剂量-效应关系，TVOC浓度与小鼠肺灌洗液中TNF-α表达呈正相关。

进一步，优选的是，步骤（1）中，抽吸采用十通道转盘式吸烟机。