[发明专利]终末效应T细胞亚群在制备辅助评估再生障碍性贫血病情程度试剂盒中的应用

权利要求书

1.终末效应T细胞亚群在制备辅助诊断非重型再生障碍性贫血和重型再生障碍性贫血试剂盒中的应用，其特征在于：所述的终末效应T细胞亚群是CD8⁺CD45RO^-CD27^- T细胞亚群。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒包括如下检测CD8⁺CD45RO^-CD27^- T细胞亚群的不同的荧光标记的单克隆抗体：抗CD3抗体、抗CD8抗体、抗CD45RO抗体和抗CD27抗体。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：

所述的抗CD3抗体的荧光标记为FITC；

所述的抗CD8抗体的荧光标记为PerCp-Cy5.5；

所述的抗CD45RO抗体的荧光标记为BV510；

所述的抗CD27抗体的荧光标记为PE-Cy7。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒还包括用于裂解外周血红细胞的红细胞裂解液、细胞染色缓冲液和磷酸盐缓冲溶液。

5.一种非疾病诊断或治疗目的的CD8⁺CD45RO^-CD27^- T细胞亚群的检测方法的应用，其特征在于：所述的应用是用于研究CD8⁺CD45RO^-CD27^- T细胞亚群在诊断非重型再生障碍性贫血和重型再生障碍性贫血患者中T细胞免疫异常的机理；

所述的检测方法包括如下步骤：

（1）处理待测外周血样本，形成单细胞悬液；

（2）在步骤（1）得到的单CD8⁺CD45RO^-CD27^- T细胞悬液中加入标记不同荧光的单克隆抗体：抗CD3抗体、抗CD8抗体、抗CD45RO抗体和抗CD27抗体，轻轻混匀后避光孵育；

（3）洗涤细胞后加入PBS重悬细胞，采用流式细胞仪上机检测，获得荧光标记后的CD8⁺CD45RO^-CD27^- T细胞亚群的数据。

6.根据权利要求5所述的检测方法的应用，其特征在于：

所述的抗CD3抗体的荧光标记为FITC；

所述的抗CD8抗体的荧光标记为PerCp-Cy5.5；

所述的抗CD45RO抗体的荧光标记为BV510；

所述的抗CD27抗体的荧光标记为PE-Cy7。

7.根据权利要求5所述的检测方法的应用，其特征在于：

步骤（1）中所述的处理待测外周血样本的具体步骤如下：将待测外周血依据常规方法进行全血红细胞裂解处理，离心去上清，并用细胞染色缓冲液重悬得到单细胞悬液；

所述的细胞染色缓冲液的用量按其与所述的待检测外周血样本体积比=1:1.5～2.5配比计算；

步骤（2）中所述的避光孵育的具体操作为室温避光孵育15～30分钟；

步骤（3）中所述的洗涤是使用细胞染色缓冲液进行洗涤。

8.根据权利要求7所述的检测方法的应用，其特征在于：

步骤（2）中所述的抗CD3抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3～6μL抗CD3抗体计算； 所述的抗CD3抗体的浓度为200μg/mL；

步骤（2）中所述的抗CD8抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3～6μL抗CD8抗体计算；所述的抗CD8抗体的浓度为200μg/mL；

步骤（2）中所述的抗C45RO抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3～6μL抗CD45RO抗体计算； 所述的抗CD45RO抗体的浓度为200μg/mL；

步骤（2）中所述的抗CD27抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3～6μL抗CD27抗体计算；所述的抗CD27抗体的浓度为200μg/mL。