[发明专利]一种肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法

说明书

一种肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法，属于抗体检测领域，能够实现对水貂血清中肺炎克雷伯菌抗体水平的快速检测。本发明包括包被抗原、包被缓冲液、2％BSA封闭液、PBST洗涤缓冲液、一抗阳性血清、阴性对照血清、样品稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液；包被抗原为用包被缓冲液稀释成浓度为10⁷～10⁹cfu/mL的病原菌液。通过试验证实本发明的肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测试剂盒具有特异性好、灵敏度高、重复性好、快速、简便、准确等特点，同时还具有结果稳定、使用范围广的优点，可用于水貂血清中肺炎克雷伯菌抗体的大规模检测，有利于了解整个水貂群肺炎克雷伯菌病抗体的状况。

技术领域

本发明属于抗体检测技术领域，具体涉及一种肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法。

背景技术

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，Kpn)为革兰阴性菌，属于肠杆菌科克雷伯菌属，是动物呼吸道和肠道内的寄生性条件致病菌，正常条件下极少侵害家畜，只有在特殊情况下如免疫功能低下或长期使用抗菌药物时，能致动物的肺炎、子宫炎、乳腺炎及其他化脓性炎症，偶尔能引起败血症。水貂肺炎克雷伯病是由肺炎克雷伯菌引起的，以肺部出血、脓肿、蜂窝织炎、麻痹和脓毒败血症为特征的传染病。近年来，有关肺炎克雷伯氏菌感染水貂被而引起严重疾病的报道迅速增加，其在毛皮动物养殖业中的危害越发严重，已成为危害水貂养殖的主要传染病之一。因此，建立简便，稳定的血清中肺炎克雷伯菌抗体检测技术，尤其是早期快速检测技术就显得尤为重要和迫切。

目前，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测肺炎克雷伯菌抗体的研究尚未见报道。

发明内容

为克服现有技术存在的不足，本发明提供一种肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法，能够实现对水貂血清中肺炎克雷伯菌抗体水平的快速检测。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的一种肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测试剂盒，包括：包被抗原、包被缓冲液、BSA封闭液、PBST洗涤缓冲液、一抗阳性血清、阴性对照血清、样品稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液；

所述包被抗原为用包被缓冲液稀释成浓度为10⁷～10⁹cfu/mL的病原菌液；

所述一抗阳性血清是以肺炎克雷伯菌为抗原，免疫水貂获得的血清；

所述阴性对照血清为未进行免疫的水貂血清。

作为优选的实施方式，所述包被缓冲液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6。

作为优选的实施方式，所述2％BSA封闭液为质量浓度1～5％的牛血清蛋白溶液。

作为优选的实施方式，所述PBST洗涤缓冲液为0.15M的PBS溶液。

作为优选的实施方式，所述样品稀释液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6。

作为优选的实施方式，所述酶标二抗为兔抗貂IgG-HRP酶标抗体。

作为优选的实施方式，所述底物显色液为可溶型单组分TMB四甲基联苯胺底物溶液。

作为优选的实施方式，所述终止液为2M的H₂SO₄。

本发明还提供了一种肺炎克雷伯菌抗体ELISA快速检测方法，包括以下步骤：

步骤一、抗原包被