[发明专利]木寡糖的制备方法

说明书

本发明公开了一种木寡糖的制备方法，包括：以天然木聚糖为酶解底物，依次用耐高温木聚糖内切酶和双功能木聚糖水解酶进行酶解，制得木寡糖；其中，所述耐高温木聚糖内切酶至少包括氨基酸片段V‑F‑E‑F‑E‑D‑R‑R‑T‑D‑L‑L‑E‑P‑A‑E，所述双功能木聚糖水解酶至少包括以下氨基酸片段E‑N‑Q‑N‑D‑I‑P、G‑G‑G、F‑S‑A、D‑D‑P‑V‑E‑R、D‑D‑S以及R‑H‑G。本发明无需对底物进行化学预处理，酶解效率高，工艺成本低。

技术领域

本发明涉及木寡糖的制备方法。更具体地说，本发明涉及无需对底物进行化学预处理的木寡糖的制备方法。

背景技术

木寡糖作为益生元广泛应用于保健食品产业，其还可作为保湿剂或低热量添加剂在食品中使用。农产品加工副产物中蕴含丰富的木聚糖资源。木寡糖是以木聚糖为底物通过木聚糖酶水解β-1,4木糖苷键而得到的以木二糖、木三糖和木四糖等为主要成分的低聚木糖混合物。玉米芯、甘蔗渣、稻壳中均有较高木聚糖含量，是制备木寡糖的理想天然原料。然而，由于天然木聚糖分子是一种杂合多聚糖，主链与侧链分子间的交联致使木聚糖形成了难以被酶解的复杂网络化底物结构，现有酶解木聚糖工艺存在酶解效率低，工艺成本高等问题。因此，亟需设计一种能够一定程度克服上述缺陷的方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种木寡糖的制备方法，其无需对底物进行化学预处理，酶解效率高，工艺成本低。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了木寡糖的制备方法，包括：

以天然木聚糖为酶解底物，依次用耐高温木聚糖内切酶和双功能木聚糖水解酶进行酶解，制得木寡糖；

其中，所述耐高温木聚糖内切酶至少包括氨基酸片段V-F-E-F-E-D-R-R-T-D-L-L-E-P-A-E，所述双功能木聚糖水解酶至少包括以下氨基酸片段E-N-Q-N-D-I-P、G-G-G、F-S-A、D-D-P-V-E-R、D-D-S以及R-H-G。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，所述双功能木聚糖水解酶至少包括以下氨基酸片段E-N-Q-N-D-I-P-L-F-D、G-G-G、L-G-F-S-A-G-G、D-K-K-N-D-D-P-V-E-R、S-D-D-S-S以及H-G-R-H-G-L-G-L。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，所述耐高温木聚糖内切酶为Caldicellulosiruptorowensensis来源，所述双功能木聚糖水解酶为Caldicellulosiruptor lactoaceticus来源。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，所述耐高温木聚糖内切酶在NCBI数据库中的编号为ADQ03732。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，所述双功能木聚糖水解酶在NCBI数据库中的编号为WP014043093。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，以天然木聚糖为酶解底物，加入耐高温木聚糖内切酶，在50～95℃下反应20～60h，然后向反应液中加入双功能木聚糖水解酶，在40～80℃下反应20～60h，从酶解液中分离木寡糖。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，以10～15wt％的天然木聚糖为酶解底物，加入50～500U/mL耐高温木聚糖内切酶，在50～95℃下反应24～48h，然后向反应液中加入100～500U/mL双功能木聚糖水解酶，在40～80℃下反应24～48h，从酶解液中分离木寡糖。

优选的是，所述的木寡糖的制备方法，所述耐高温木聚糖内切酶或双功能木聚糖水解酶的制备方法包括：根据耐高温木聚糖内切酶或双功能木聚糖水解酶基因构建重组质粒，将重组质粒转化进入宿主，得到基因工程菌，培养、诱导基因工程菌，从培养液中分离出耐高温木聚糖内切酶或双功能木聚糖水解酶。