[发明专利]碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法

权利要求书

1.一种碳量子点的复合探针，其特征在于：通过以下制备方法得到，包括：

(1)碳量子点的制备：

将0.3g已粉碎的玉米秸秆与30mL去离子水在反应釜中混合均匀，然后将反应釜置于200℃条件下恒温水热反应6h；反应结束后，待其冷却至室温，先用滤纸粗滤，再用0.22μm微孔过滤膜过滤并用透析袋透析2-3天；冷冻干燥即可得到以秸秆为碳源的碳量子点；

(2)碳量子点氨基化：

将1mL乙二胺与步骤(1)中10mL碳量子点在反应釜中混匀，然后将反应釜置于180℃下恒温反应5h；反应结束后，待其冷却至室温，用0.22μm微孔过滤膜过滤并用透析袋透析2-3天即可得到氮掺杂的碳量子点；

(3)复合探针的制备：

①分别称取50mg的EDC和NHS，溶于5mL氮掺杂的碳量子点，在室温下搅拌4h；

②称取7mg水溶性的两性霉素B，溶于2mL的PBS缓冲液中，混匀备用；

③将步骤①产生的液体与步骤②产生的液体混匀，并在室温下搅拌6h；

④最后将步骤③中的混合液放在透析袋里透析2-3天，得到的液体即是氮掺杂碳量子点与两性霉素B复合的荧光探针。

2.根据权利要求1所述的碳量子点的复合探针检测白色念珠菌含量的方法，其特征在于：

(1)将食材切成小块，置于锥形瓶中121℃灭菌20min，除去杂菌，备用；

(2)从平板上挑取白色念珠菌的单克隆菌落于10mL含步骤(1)中食材的SAB培养基中，37℃，200rpm摇床过夜培养；

(3)将1mL复合探针与1mL步骤(2)混合液混合均匀；并放入37℃、200rpm的摇床中混合培养5min，使复合探针中的两性霉素B能够与实样中的白色念珠菌充分结合；

(4)取1mL步骤(3)中混合液在25℃，10000rpm条件下，离心5min，除去上清；用PBS重悬，重复3次；

(5)将步骤(4)中的重悬液体置于石英比色皿中，用荧光分光光度计测定激发波长在355nm条件下的荧光强度值；

(6)将所测得的荧光强度值代入制备的荧光标准曲线中，计算出白色念珠菌的含量。

3.根据权利要求2所述的碳量子点的复合探针检测白色念珠菌含量的方法，其特征在于：所述的荧光标准曲线是荧光强度值与白色念珠菌浓度标准曲线，其获得方法是：

(1)配制一系列浓度的白色念珠菌溶液样品；

(2)将1mL不同浓度的菌液样品分别与1mL复合探针混合均匀；

(3)将步骤(2)中的混合液放入37℃、200rpm的摇床中混合培养5min；

(4)将步骤(3)中的混合液在25℃，10000rpm条件下，离心5min，除去上清；用PBS重悬，重复3次；

(5)将步骤(4)中混合溶液置于石英比色皿中，用荧光分光光度计测定激发波长在355nm条件下的荧光强度值；

(6)以荧光强度值为纵坐标，白色念珠菌的浓度为横坐标，拟合建立荧光标准曲线。

4.根据权利要求2或3所述的碳量子点的复合探针检测白色念珠菌含量的方法，其特征在于：所述的荧光标准曲线包含由水溶性的两性霉素B获得的荧光标准曲线和由醇溶性的两性霉素B获得的荧光标准曲线。