[发明专利]碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法

说明书

一种碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法，属于检测技术领域。本发明的目的是以廉价的生物质玉米秸秆为碳源制备具有荧光的碳量子点，再以碳量子点为基础对其进行修饰制成复合探针，进而检测白色念珠菌的碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法。本发明首先制备碳量子点，然后对碳量子点氨基化，最后制备复合探针。本发明制备原料丰富低廉，制备过程简单，灵敏度高，解决了现有方法的问题如干扰因素多、操作复杂、耗时耗力等。

技术领域

本发明属于检测技术领域。

背景技术

真菌是生物界中很大的一个群体，种类繁多，在生长过程中会产生一定的毒素，近年来真菌类感染呈逐年上升的趋势。白色念珠菌也称假丝酵母菌，是导致真菌感染的重要因素之一，此外它还是重要的食源性致病菌，因此快速准确检测白色念珠菌的含量在食品安全检测领域具有重要的意义。

近年来国内食品检测机构对白色念珠菌的检测几乎全是利用白色念珠菌的形态特征和生理生化特性，用微生物培养的传统方法对白色念珠菌进行分离鉴定。这些传统检测手段均存在一定的缺陷，如常规的平板计数法耗时长、工作量大且易产生假阳性的情况。由于白色念珠菌是一种条件致病菌，其致病性与之存在量效关系，因此定量检测方法的建立对判断食品受污染的程度以及可食用性具有重要的意义。基于以上研究状况，需发明一种简单、准确、快速的方法检测白色念珠菌。

碳量子点是尺寸在10nm以下、具有单分散性、几何形状近似于类球形的一种新型的荧光碳纳米功能材料。相对于传统有机染料和金属量子点，碳量子点对环境危害小、制备成本低廉、低毒、易于功能化，并且具有良好的生物相容性；因此越来越多的研究者将其广泛地应用在细胞标记、生物成像、药物传输、荧光探针、有机污染物降解、光解水制氢与光催化剂等领域。

发明内容

本发明的目的是以廉价的生物质玉米秸秆为碳源制备具有荧光的碳量子点，再以碳量子点为基础对其进行修饰制成复合探针，进而检测白色念珠菌的碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法。

本发明的复合探针：

(1)碳量子点的制备：

将0.3g已粉碎的玉米秸秆与30mL去离子水在反应釜中混合均匀，然后将反应釜置于200℃条件下恒温水热反应6h；反应结束后，待其冷却至室温，先用滤纸粗滤，再用0.22μm微孔过滤膜过滤并用透析袋透析2-3天；冷冻干燥即可得到以秸秆为碳源的碳量子点；

(2)碳量子点氨基化：

将1mL乙二胺与步骤(1)中10mL碳量子点在反应釜中混匀，然后将反应釜置于180℃下恒温反应5h；反应结束后，待其冷却至室温，用0.22μm微孔过滤膜过滤并用透析袋透析2-3天即可，得到的氮掺杂的碳量子点；

(3)复合探针的制备：

①分别称取50mg的EDC和NHS，溶于5mL氮掺杂的碳量子点，在室温下搅拌4h；

②称取7mg水溶性的两性霉素B，溶于2mL的PBS缓冲液中，混匀备用；

③将步骤①产生的液体与步骤②产生的液体混匀，并在室温下搅拌6h；

④最后将步骤③中的混合液放在透析袋里透析2-3天，得到的液体即是氮掺杂碳量子点与两性霉素B复合的荧光探针。

本发明复合探针检测白色念珠菌含量的方法：

(1)将食材切成小块，置于锥形瓶中121℃灭菌20min，除去杂菌，备用；

(2)从平板上挑取白色念珠菌的单克隆菌落于10mL含步骤(1)中食材的SAB培养基中， 37℃，200rpm摇床过夜培养；