[发明专利]一种响应面法优化的蜜桂枝微波炮制工艺

权利要求书

1.一种响应面法优化的蜜桂枝微波炮制工艺，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1、蜜桂枝的微波炮制，取熟蜜，加适量开水稀释，淋入净桂枝片内拌匀，闷润，平铺于微波炉内，加热，取出晾凉；桂枝与炼蜜的质量比为20：3；

S2、色谱条件设置，色谱柱：Agilent TC- C18，250mm×4.6mm，5μm柱；流动相:乙腈-0.1％磷酸溶液28:72；流速：1.0 mL·min^-1；柱温：30 ℃；检测波长：290 nm；

S3、对照品溶液的制备，精密称取桂皮醛10.5 mg，香豆素3.0 mg，桂皮酸1.0 mg，桂皮醇4.0 mg，加甲醇充分溶解于50 mL容量瓶中，摇匀，即得；再精密吸取各对照品溶液0.25mL，0.5mL，1.0mL，2.0mL，4.0 mL，分别置于10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列质量浓度对照品溶液；

S4、供试品溶液的制备，取供试品细粉1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称质量，超声提取30 min，取出，待冷却后称重，加适量甲醇，用0.22 μm滤膜过滤，取滤液，摇匀；

S5、线性关系考察，将步骤S3下制得的系列对照品溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪中，在步骤S2的色谱条件测定峰面积，以峰面积y为纵坐标，以各对照品溶液的浓度x为横坐标建立标准曲线，分别得到回归方程；香豆素，y=57.213x-0.0104；桂皮酸，y=1241.8x-0.0109；桂皮醛，y=1874.3x+1.7521；桂皮醇，y=628.5x+0.0343；

S6、精密度试验，分别精密吸取香豆素对照品溶液、桂皮酸对照品溶液、桂皮醛对照品溶液及桂皮醇对照品溶液各10µL，按照步骤S2的色谱条件下连续进样6次，测定峰面积；

S7、稳定性试验，分别精密吸取香豆素供试品溶液、桂皮酸供试品溶液、桂皮醛供试品溶液及桂皮醇供试品溶液各10µL，按照步骤S2的色谱条件下分别于 0h，2h，4h，8h，12h，24h进样，并测定峰面积；

S8、重复性试验，按照步骤S4下供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，按照步骤S2的色谱条件下测定峰面积；

S9、加样回收率试验，取已知含量的样品精密称定，分别精密加入香豆素对照品溶液、桂皮酸对照品溶液、桂皮醛对照品溶液及桂皮醇对照品溶液适量，按步骤S4项下方法制备供试品溶液，步骤S2的色谱条件下测定，求得平均加样回收率；

S10、样品含量测定，取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按步骤S2的色谱条件下进行进样分析，并计算出各样品中桂皮醛、香豆素、桂皮酸及桂皮醇的含量；

响应面法优化微波炮制工艺，根据单因素实验结果，结合Design-Expert 软件，利用响应面法在单因素实验条件下对蜜桂枝的炮制工艺进行优化，以火力大小A、 闷润时间B、炮制时间C、炼蜜用量D为自变量，按照−1、0、1 的低、中、高三水平编码，以桂皮醛、香豆素、桂皮酸及桂皮醇的OD 值Y为响应值， 经Design-Expert软件整理出的A、B、C、D与Y的多项式方程为：

Y=-12.7692+0.12X₁+1.99X₂+3.88X₃+0.012X₄-0.021X₁X₂-6.10X₁X₃-4.63X₁X₄+0.029X₂X₃+0.042X₂X₄-0.015X₃X₄-0.0001X₁²-0.64X₂²-0.35X₃²+2.61X₄²；

其中火力大小A为40%，炼蜜用量D为17.5%，炮制时间C为5 min，闷润时间B为96min。