[发明专利]一种用于判别和校准高通量测序污染的内标及其应用

权利要求书

1.一种用于判别和校准高通量测序污染的内标，其特征在于：

所述内标为DNA或者RNA片段；

所述内标长度在几十到几千个碱基或碱基对；

所述内标为单链或者双链；

所述内标选自人工合成、外源物种序列、样本本身的一段序列；

所述内标需被引物识别，或者所述内标不需要被引物识别；

同批次每一个样本对应不同的内标，或者同批次每一个不同的样本对应一个不同的内标。

2.根据权利要求1所述的用于判别和校准高通量测序污染的内标，其特征在于：

所述内标的长度在几十到几百个碱基；

所述内标为人工合成或外源物种PCR产物；

同批次每一个样本对应不同的内标。

3.一种用于判别和校准高通量测序污染的内标引物，其特征在于：

所述内标引物专门针对单个样本中某一段或几段DNA或RNA片段；

所述内标引物针对的片段长度最短不短于引物长度，最长不超过高通量测序仪读长；

同批次每一个样本使用不同的内标引物，在文库构建过程中扩增出各样本不同的片段，成为内标，所述内标如权利要求1所述的内标。

4.一种判别和校准高通量测序污染的方法，其特征在于，所述方法包括在每个样本或标签中引入如权利要求1-3中任一项所述的内标或内标引物。

5.根据权利要求4所述的判别和校准高通量测序污染的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)加入如权利要求1-3中任一项所述的内标或内标引物；

(2)在文库构建过程中用样本标签标记样本，获得高通量测序原始数据，进行样本分离，将具有相同样本标签的数据划分到同一个子集中；

(3)识别该子集的内标，有且仅有与某一个样本对应的内标的，被判定为正常，具有与该样本不同的一个或多个其他内标的，被判定为污染。

6.根据权利要求4所述的判别和校准高通量测序污染的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)加入如权利要求1-3中任一项所述的内标或内标引物；

(2)在文库构建过程中用样本标签标记样本，获得高通量测序原始数据，进行样本分离，先抽取一个内标的测序数据，将具有相同内标或内标引物的数据划分到同一个子集中；

(3)识别该子集的样本标签，有且仅有该内标对应的样本标签或样本标签组合的，被判定为正常，具有与该内标不同的一个或多个样本标签或样本标签组合的，被判定为污染。

7.根据权利要求5或6所述的判别和校准高通量测序污染的方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，将所述内标或内标引物添加到文库构建开始之前的反应体系中。

8.根据权利要求4所述的判别和校准高通量测序污染的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)样本核酸提取前或提取后，在每个样本中加入不同的内标；

(2)使用没有被污染的样本标签，进行文库建构；获得高通量测序原始数据，进行样本分离时，将具有相同样本标签或组合的数据划分到同一个子集中；

(3)识别该子集的内标，有且仅有与某一个样本对应的内标的，被判定为正常，具有与该样本不同的一个或多个内标的，被判定为样本污染。

9.一种高通量测序试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1或2所述的内标或权利要求3所述的内标引物。

10.一种高通量测序分析流程，其特征在于：包括利用如权利要求1-3中任一项所述的内标或内标引物判别或校正高通量测序中的污染的分析步骤。