[发明专利]抗HSA单域抗体及其融合蛋白的亲和层析纯化方法有效
申请号: | 201910024941.1 | 申请日: | 2019-01-10 |
公开(公告)号: | CN111423509B | 公开(公告)日: | 2021-07-09 |
发明(设计)人: | 万云超;郜鹏;周加义;何志娟;郭树华 | 申请(专利权)人: | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K16/18 | 分类号: | C07K16/18;C07K19/00;C07K1/22 |
代理公司: | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人: | 张黎 |
地址: | 215000 江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | hsa 抗体 及其 融合 蛋白 亲和 层析 纯化 方法 | ||
1.一种抗HSA单域抗体或其融合蛋白的亲和层析纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,亲和层析介质的制备:
将HSA与亲和介质混合,偶联反应,制得HSA亲和层析介质;
步骤2,用步骤1制得的HSA亲和层析介质对待纯化的样品进行纯化:
平衡:用平衡缓冲液平衡步骤1制得的HSA亲和层析介质;
上样:将待纯化的样品通过平衡好的亲和层析介质,使样品与亲和层析介质结合;
清洗:用清洗缓冲液清洗结合了样品的亲和层析介质;
洗脱:用洗脱缓冲液将抗HSA单域抗体或其融合蛋白从亲和层析介质上洗脱下来,收集洗脱峰得到洗脱样品;
中和:用中和缓冲液调节洗脱样品至中性,即得;
所述抗HSA单域抗体的重链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO:4-6所示的HCDR。
2.根据权利要求1所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述步骤2中待纯化的样品为表达了抗HSA单域抗体或包含抗HSA单域抗体的融合蛋白的细胞或培养液。
3.根据权利要求1所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述步骤1中的亲和介质选自交联琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、丙烯酰胺聚合物、聚醚砜或脱乙酰壳多糖。
4.根据权利要求1所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述平衡缓冲液为包含磷酸盐或Tris的缓冲液;所述清洗缓冲液为包含磷酸盐、Tris或硼酸的缓冲液;所述洗脱缓冲液为包含磷酸盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或铵盐的缓冲液;所述中和缓冲液为包含Tris或精氨酸的缓冲液。
5.根据权利要求4所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述平衡缓冲液为包含PB和NaCl的缓冲液;所述清洗缓冲液为包含PB和NaCl的缓冲液;所述洗脱缓冲液为包含醋酸-醋酸钠的缓冲液;所述中和缓冲液为包含Tris-HCl的缓冲液。
6.根据权利要求4所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述平衡缓冲液的pH值为6.0-8.5;所述清洗缓冲液的pH值为6.0-8.5;所述洗脱缓冲液的pH值为2.5-9.0;所述中和缓冲液的pH值为6.5-9.0。
7.根据权利要求2所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述表达了包含抗HSA单域抗体的融合蛋白的细胞或培养液的制备方法如下:
将具有治疗功能的多肽分子与抗HSA单域抗体通过柔性连接子串联,合成融合蛋白基因片段并插入至载体得到重组质粒,将重组质粒导入表达宿主细胞进行表达得到表达了包含抗HSA单域抗体的融合蛋白的细胞或培养液。
8.根据权利要求7所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述宿主细胞为细菌、酵母菌、丝状真菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞或植物细胞。
9.根据权利要求1所述的亲和层析纯化方法,其特征在于,所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示。
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