[发明专利]一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法及应用

权利要求书

1.一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备地龙应激蛋白：

将鲜活的地龙用0.9％的NaCl溶液清洗多次，除去体表污物，清洗后的地龙在25℃下置于有空气泵不断供氧系统的生理盐水溶液中4小时让其吐出体内泥沙；捞出后用吸水纸除去表面水分并转移至烧杯中；加入地龙总重量10％的蔗糖后迅速用玻璃棒快速搅拌均匀，等待10min后收集烧杯中的黄绿色液体即为地龙应激蛋白，加入1X的抗蛋白降解酶，然后加入浓度为0.02％的NaN₃作为防腐剂得到地龙应激蛋白液，存贮备用；

S2、制备层状金属氧化物纳米载体

称取6mmol的Ni(NO₃)₂与30mmol的十二烷基磺酸钠混合均匀后加入300ml水中不断搅拌过夜，然后转入水热合成反应釜中，将反应釜加热至110℃反应16小时后自然冷却；过滤后得到的产物用乙醇与水的混合液冲洗至洗液无色后置于真空干燥箱中，在70℃下干燥12小时，所得的粉末与10g Na₂HPO₄放到瓷舟两侧后将瓷舟放入管式炉中，其中NaH₂PO₄一端放置在进气口一侧，粉末样品一端放置在管式炉出气口一侧，N₂环境下加热至350℃后自然冷却得到NiP层状金属氧化物纳米载体；

S3、制备金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物

称取10g白芨，用去离子水煎熬半小时后过滤，收集溶液后利用旋转蒸发仪除去多余水分，将所得糊状物质进行冷冻干燥，收集白芨提取物粉末；将所得白芨提取物粉末与S1中制备得到的地龙应激蛋白液混合得到地龙应激蛋白混合液，后然后加入2倍于地龙应激蛋白混合液体积的浓度为20mM、pH为7.2的Tris-HCl缓冲液得到混合液；量取混合液20ml与5.0gNiP层状金属氧化物纳米载体混合，4℃下搅拌8小时；离心混合液收集沉淀，冷冻干燥后收集粉末，即得到金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物。

2.根据权利要求1所述的金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法，其特征在于：所述S1中地龙选用赤子爱胜蚓。

3.根据权利要求1所述的金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法，其特征在于：所述S2中乙醇与水的体积比为1：1。

4.根据权利要求1所述的金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法，其特征在于：所述S3中白芨提取物粉末与地龙应激蛋白液按照质量比1：1进行混合制得地龙应激蛋白混合液。

5.一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物的应用，其特征在于：采用如权利要求1-4任一所述的一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法制得的金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物用作大鼠颅脑损伤修复药物。