[发明专利]一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法及应用，制备地龙应激蛋白，制备层状金属氧化物纳米载体，制备金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物，所述复合物应用于大鼠颅脑损伤修复中。与现有技术相比，本发明将地龙应激蛋白与中药白芨的有效成分自组装入层状纳米材料中，从而制备了一种具有缓释、经济的医用药物制剂，在保存了药效的同时还有效降低了蛋白的降解和中药成分的氧化损失，最终达到了促进颅脑损伤康复的目的。

技术领域

本发明涉及动物蛋白与植物药材纳米中药复合物制备技术领域，特别是一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法及应用。

背景技术

颅脑损伤是现代社会常见的一种损伤，尤其在交通肇事案例中。患者由于外部物体对脑部的撞击，严重破坏了大脑的正常功能，从而导致暂时或者永久性的认知、生理和心里功能的丧失。目前颅脑损伤已经成为45岁以下人群中死亡和残疾的首要病因。中药地龙蛋白已经被证实能够有效促进创伤组织细胞的增殖和分化，加速创伤愈合的能力。但是因为地龙蛋白作为一种生物大分子，非常容易发生蛋白质降解，在实际使用过程中存在消耗量大，经济成本高等问题。白芨在中药药理上具有收敛止血，消肿生肌的功效，但是其在实际使用中也存在消耗量过大，难于商品化生产等问题。

因此，亟待开发一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物。

发明内容

本发明的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法及应用。

为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的：

一种金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物制备方法，包括以下步骤：

S1、制备地龙应激蛋白：

将鲜活的地龙用0.9％的NaCl溶液清洗多次，除去体表污物，清洗后的地龙在25℃下置于有空气泵不断供氧系统的生理盐水溶液中4小时让其吐出体内泥沙；捞出后用吸水纸除去表面水分并转移至烧杯中；加入地龙总重量10％的蔗糖后迅速用玻璃棒快速搅拌均匀，等待10min后收集烧杯中的黄绿色液体即为地龙应激蛋白，加入1X的抗蛋白降解酶，然后加入浓度为0.02％的NaN₃作为防腐剂得到地龙应激蛋白液，存贮备用；

S2、制备层状金属氧化物纳米载体

称取6mmol的Ni(NO₃)₂与30mmol的十二烷基磺酸钠混合均匀后加入300ml水中不断搅拌过夜，然后转入水热合成反应釜中，将反应釜加热至110℃反应16小时后自然冷却；过滤后得到的产物用乙醇与水的混合液冲洗至洗液无色后置于真空干燥箱中，在70℃下干燥12小时，所得的粉末与10g Na₂HPO₄放到瓷舟两侧后将瓷舟放入管式炉中，其中NaH₂PO₄一端放置在进气口一侧，粉末样品一端放置在管式炉出气口一侧，N₂环境下加热至350℃后自然冷却得到NiP层状金属氧化物纳米载体；

S3、制备金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物

称取10g白芨，用去离子水煎熬半小时后过滤，收集溶液后利用旋转蒸发仪除去多余水分，将所得糊状物质进行冷冻干燥，收集白芨提取物粉末；将所得白芨提取物粉末与S1中制备得到的地龙应激蛋白液混合得到地龙应激蛋白混合液，后然后加入2倍于地龙应激蛋白混合液体积的浓度为20mM、pH为7.2的Tris-HCl缓冲液得到混合液；量取混合液20ml与5.0gNiP层状金属氧化物纳米载体混合，4℃下搅拌8小时；离心混合液收集沉淀，冷冻干燥后收集粉末，即得到金属氧化物纳米白芨地龙蛋白复合物。

进一步，所述S1中地龙选用赤子爱胜蚓。

进一步，所述S2中乙醇与水的体积比为1：1。