[发明专利]一种荆半夏组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种荆半夏组织培养快速繁殖方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1、培养基的配制：

基本培养基：用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；

诱导培养基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.4～0.6mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+琼脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

愈伤组织增殖培养基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

愈伤组织分化培养基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+琼脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；或者为

MS+TDZ 0.5mg/L+琼脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

液体加速培养基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

固体壮苗培养基：MS+2,4-D 0.4～0.6mg/L+6-BA 0.8～1.2mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

步骤2、外植体的选择：取半夏的种子，经灭菌处理，催芽，取其茎段作为脱毒组培用的外植体；

步骤3、培养基诱导获得愈伤组织：将外植体置于诱导培养基中诱导得到愈伤组织；

步骤4、愈伤组织增殖培养：将步骤3得到的愈伤组织切成块，置于愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养获得大量愈伤组织；

步骤5、愈伤组织分化培养：将步骤4中得到的愈伤组织置于愈伤组织分化培养基中进行分化培养获得大量绿色丛芽；

步骤6、加速培养：将带有绿色丛芽的愈伤组织置于液体加速培养基培养初步分化好的半夏幼苗；

步骤7、壮苗培养：将步骤6得到的初步分化好的半夏幼苗置于固体壮苗培养基中培养形成高度5cm以上的组培苗；

步骤8、炼苗移栽：将所述组培苗的根系冲洗干净，栽培于草炭土上培养。

2.如权利要求1所述的荆半夏组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2中培养基的配制：

诱导培养基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+琼脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

愈伤组织增殖培养基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

愈伤组织分化培养基：MS+TDZ 0.5mg/L+琼脂0.7mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8；

液体加速培养基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8；

固体壮苗培养基：MS+2,4-D 0.5mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+葡萄糖30g/L，pH5.8。

3.如权利要求1所述的荆半夏组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2中半夏种子灭菌前进行预处理，具体为：收集成熟的荆半夏种子，去除外果皮，35℃水浴3-4天。

4.如权利要求1所述的荆半夏组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2中催芽的具体步骤为：在超净工作台上，取无菌培养皿，培养皿为两层无菌滤纸，用无菌水润湿，把消毒后的种子置于培养皿上，种子消毒方式为0.1％高锰酸钾消毒25min，然后75％乙醇消毒5min，最后0.1％升汞消毒10min，无菌水冲洗4-5次，每次3min左右，避光，25℃催芽。

5.如权利要求1所述的荆半夏组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤3中，待胚轴长度1～3cm时，把胚轴切成0.5cm～0.7cm小段，转接在诱导培养基中25℃培养室中进行培养18天～22天。