[发明专利]一种发酵制备达托霉素的方法

权利要求书

1.一种发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，在发酵培养过程中，加入邻氨基苯甲酸钠；

当采用摇瓶发酵培养时，在发酵液中，所述邻氨基苯甲酸钠的浓度为0.6g/L～1.2g/L；

当采用发酵罐培养时，在发酵液中，发酵罐中所述邻氨基苯甲酸钠的浓度为0.333g/L～0.533g/L；

和，发酵培养的菌种为玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)，所述玫瑰孢链霉菌为玫瑰孢链霉菌NRRL11379菌株；

和，所述发酵培养过程中，采用的达托霉素发酵培养基在进行接种前的pH值为7.3-7.7。

2.根据权利要求1所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸钠通过下述步骤制得：将邻氨基苯甲酸甲酯与氢氧化钠水溶液反应生成邻氨基苯甲酸钠。

3.根据权利要求2所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸钠通过下述步骤制得：在50～70℃下，向邻氨基苯甲酸甲酯中滴加氢氧化钠水溶液进行反应完全，得反应液。

4.根据权利要求3所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸钠通过下述步骤制得：在60℃下，在搅拌条件下，向70mL邻氨基苯甲酸甲酯中滴加3M氢氧化钠水溶液进行反应完全，得反应液。

5.根据权利要求3或4所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，将所得反应液离心，取上清液，用活性炭吸附后，旋蒸浓缩，重结晶即可。

6.根据权利要求1所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述发酵培养过程中，采用的达托霉素发酵培养基在进行接种前的pH值为7.5。

7.如权利要求1所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸钠以溶液的形式添加；

当所述邻氨基苯甲酸钠以溶液的形式添加时，所选溶剂为水；

当所述邻氨基苯甲酸钠以溶液的形式添加时，溶液中，所述邻氨基苯甲酸钠的浓度为0.05～2g/mL； 当所述邻氨基苯甲酸钠采用流加模式添加时，溶液的流速为0.05～0.08g/L/h和/或，所述邻氨基苯甲酸钠在添加前，需进行灭菌处理。

8.如权利要求1所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸钠在所述发酵培养的0h、24h、48h、72h或96h加入。

9.如权利要求8所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸钠在所述发酵培养的24h加入。

10.如权利要求1所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，将玫瑰胞链霉菌(Streptomyces roseosporus)接种于达托霉素发酵培养基中培养生产达托霉素，其中，在发酵培养过程中添加邻氨基苯甲酸钠水溶液；

将所述玫瑰胞链霉菌接种于所述达托霉素发酵培养基，然后进行常规发酵即可。

11.如权利要求10所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，所述常规发酵包括下述步骤：将玫瑰胞链霉菌种子液按质量比5～45％的接种量接种于如前所述的达托霉素发酵培养基，然后进行摇瓶发酵培养或者发酵罐发酵培养；当进行摇瓶发酵培养时，所述玫瑰胞链霉菌种子液的接种量为5～15％，当进行所述发酵罐发酵培养时，所述玫瑰胞链霉菌种子液的接种量为15～45％。

12.如权利要求11所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，当进行摇瓶发酵培养时，所述玫瑰胞链霉菌种子液的接种量为10％。

13.如权利要求11所述的发酵制备达托霉素的方法，其特征在于，当进行所述发酵罐发酵培养时，所述玫瑰胞链霉菌种子液的接种量为40％。