[发明专利]一种凝胶电泳体系，制备方法及使用其分离和检测低密度脂蛋白的方法

权利要求书

1.一种凝胶电泳体系，其特征在于，所述凝胶电泳体系包括凝胶电泳分离柱和电泳缓冲液；

所述凝胶电泳分离柱包括依次叠加的第一电泳分离段和第二电泳分离段；

所述第一电泳分离段为含有2.4~2.6 wt%聚丙烯酰胺的凝胶柱，所述第二电泳分离段为含有3~3.3 wt%聚丙烯酰胺的凝胶柱；

所述第一电泳分离段和第二电泳分离段中的凝胶柱浸没在保存液中，所述保存液为含有蔗糖和甘油的Tris-盐酸缓冲溶液；

所述Tris-盐酸缓冲溶液的pH值为6.5~7.5；

所述保存液中蔗糖的浓度为20~30 g/L；

所述保存液中甘油的浓度为2~3 g/L；

所述电泳缓冲液包括由Tris、硼酸、EDTA和水配制成的混合液；

所述电泳缓冲液的pH值为7.8~8.8；

所述电泳缓冲液中Tris的浓度为6~12.5 g/L；

所述电泳缓冲液中硼酸的浓度为3~6.5 g/L。

2.根据权利要求1所述的凝胶电泳体系，其特征在于，所述第一电泳分离段中凝胶柱的长度≥0.5 cm。

3. 根据权利要求1所述的凝胶电泳体系，其特征在于，所述第一电泳分离段中凝胶柱的长度为0.5~0.9 cm。

4. 根据权利要求1所述的凝胶电泳体系，其特征在于，所述第二电泳分离段中凝胶柱的长度≥4.5 cm。

5. 根据权利要求1所述的凝胶电泳体系，其特征在于，所述第二电泳分离段中凝胶柱的长度为4.5~6 cm。

6.根据权利要求1中所述的凝胶电泳体系，其特征在于，所述电泳缓冲液中Tris和硼酸的质量比为1.6~2:1。

7.根据权利要求1中所述的凝胶电泳体系，其特征在于，所述电泳缓冲液中Tris和硼酸的质量比为1.9~2:1。

8.一种如权利要求1~7之一所述的凝胶电泳体系的制备方法，其特征在于，所述电泳分离柱的制备方法包括如下步骤：

步骤（1），配制含有丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺的凝胶母液，将第一浓度的凝胶母液、Tris-盐酸缓冲溶液、TEMED、过硫酸铵、蔗糖、甘油和水混合，混合液灌注入底端密封的管内，成胶后得到聚丙烯酰胺含量为3~3.3 wt%的凝胶柱，即为第二电泳分离段；

步骤（2），将第二浓度的凝胶母液、Tris-盐酸缓冲溶液、TEMED、过硫酸铵、蔗糖、甘油和水混合，混合液灌注入步骤（1）中得到的第二电泳分离段的凝胶柱之上，成胶后得到聚丙烯酰胺含量为2.4~2.6 wt%的凝胶柱，即为第一电泳分离段；

步骤（3），将步骤（2）得到的含第一电泳分离段和第二电泳分离段的结构浸没在保存液中，得到所述电泳分离柱，所述保存液为含有蔗糖和甘油的Tris-盐酸缓冲溶液；

所述电泳缓冲液的制备方法包括如下步骤：

将Tris、硼酸、EDTA和水配制成的混合液，得到所述电泳缓冲液。

9.一种血浆中不同亚型的低密度脂蛋白的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括如下步骤：

步骤（a），将如权利要求1~7之一所述的凝胶电泳体系中的凝胶电泳分离柱固定在电泳槽中，其中的第一电泳分离段位于电泳槽的负极端，第二电泳分离段位于电泳槽的正极端，在电泳槽中加入电泳缓冲液，将染色后的血浆沉降于第一电泳分离段的凝胶柱表面；

步骤（b），待凝胶电泳体系中的溶液稳定后进行电泳，在凝胶电泳分离柱的第二电泳分离段中得到经过分离的不同亚型的低密度脂蛋白LDL-1、LDL-2、LDL-3、LDL-4、LDL-5、LDL-6和LDL-7。

10.一种血浆中不同亚型的低密度脂蛋白的定量检测方法，其特征在于，所述定量检测方法包括如下步骤：

步骤（a’），使用染色液对血浆进行染色；

步骤（b’），将如权利要求1~7之一所述的凝胶电泳体系中的凝胶电泳分离柱固定在电泳槽中，其中的第一电泳分离段位于电泳槽的负极端，第二电泳分离段位于电泳槽的正极端，在电泳槽中加入电泳缓冲液，将染色后的血浆沉降于第一电泳分离段的凝胶柱表面；

步骤（c’），待凝胶电泳体系中的溶液稳定后进行电泳，在凝胶电泳分离柱的第二电泳分离段中得到位于不同区域的经过分离的被染色的不同亚型的低密度脂蛋白LDL-1、LDL-2、LDL-3、LDL-4、LDL-5、LDL-6和LDL-7；

步骤（d’），使用扫描仪扫描凝胶电泳分离柱中的第一电泳分离段和第二电泳分离段中不同位置的吸光度变化，根据不同亚型的低密度脂蛋白的吸光度随位置变化得到的曲线，定量检测不同亚型的低密度脂蛋白占所有血浆脂蛋白的百分比。