[发明专利]一种凝胶电泳体系，制备方法及使用其分离和检测低密度脂蛋白的方法

说明书

本发明提供了一种凝胶电泳体系，制备方法及使用其分离和检测低密度脂蛋白的方法，本发明得到的凝胶电泳体系通过调节其中凝胶电泳分离柱中聚丙烯酰胺的含量以及电泳缓冲液的种类，使其具有能够分离和检测血浆脂蛋白LDL的各个亚型的能力，具有如下优点：（1）分离效果和分辨率远优于现有产品，电泳操作工序和分离时间也进一步缩短；（2）仅需2层凝胶即可实现电泳分离和检测，而现有试剂盒产品需要至少3层凝胶；（3）成本低廉，生产成本小于6元，远低于现有Lipoprint LDL Subfractions Kit试剂盒的120元，但检测和分离效果相同，甚至更优。

技术领域

本发明属于生物检测领域，尤其涉及一种凝胶电泳体系，制备方法及使用其分离和检测低密度脂蛋白的方法。

背景技术

心血管疾病是严重威胁人类的疾病，高血压、血脂异常、糖尿病、家族史、性别和年龄、吸烟、肥胖等多种因素均会导致该病的发生，其中，血脂异常是诱发心血管疾病发生及死亡的重要危险因素，《中国成年人血脂异常预防指南（2016年修订版）》和欧洲心脏病学会联合欧洲动脉硬化学会发布的《血脂异常管理指南》共同指出低密度脂蛋白胆固醇（LowDensity Lipoproteins-cholesterol， LDL）的含量属于导致血脂异常的一类因素，并建议以降低血浆中LDL的水平作为血脂管理最重要的干预目标。

然而，近年来的研究发现，部分高水平LDL的人群在临床上并无冠心病的表现，同时部分明确诊断为冠心病的患者其LDL水平却较正常人群偏低，且有部分患者服用药物降低LDL后仍发生冠心病事件，上述结果提示我们，正常水平的LDL并不能完全代表心血管疾病的低风险，因此需要进一步深入研究血浆中LDL及其各种亚型的含量与心血管疾病的相关性。

LDL具有异质性，由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成，根据LDL颗粒的直径和密度，可以将其分为至多7种亚型，分别被命名为LDL-1、LDL-2、LDL-3、LDL-4、LDL-5、LDL-6和LDL-7。其中，大而轻的LDL（Larger buoyant LDL，lbLDL）由颗粒直径>27 nm，密度<1.03 g/mL的LDL-1和LDL-2组成，被定义为A型；小而密的LDL（Small dense LDL，sdLDL）由颗粒直径<26 nm，密度>1.04 g/mL的LDL-3~LDL-7组成，被定义为为B型。实验表明，用sdLDL的水平作为预测和评估心血管疾病风险的指标更为精准，可见，对LDL及其各亚组分水平的全面分析能够更准确的反映心血管疾病患者体内脂蛋白的真实水平，为早期发现并降低罹患心血管疾病风险提供更有价值的临床参考指标。

多年以来人们致力于探索血浆脂蛋白检测的方法，其中电泳技术是一种比较传统的手段，经改进后具有高效和实用的优点，至今仍被广泛应用于脂蛋白的分离和检测研究，尤其是是聚丙烯酰胺凝胶电泳，其中含有的聚丙烯酰胺凝胶兼有分子筛和电荷分离的双重效应，分辨率较高，能够将血清脂蛋白分离出4条或更多的区带，具有透明度强、分离时间快、电渗作用小、操作简便、易于掌握等优点。最初的聚丙烯凝胶电泳法是由Ornstein、Davis以及Leammli 等人提出的，被广泛用于蛋白质的生物化学医药分析，然而，传统的凝胶系统对血浆脂蛋白的分辨率较低，使用的凝胶体系多为高pH的碱性系统，会导致聚丙烯酰胺凝胶不断水解，即使在2℃~8℃环境下至多保存2周，传统的凝胶体系就会丧失分离效果，水解缩短了蛋白质的迁移距离，降低了蛋白质条带的分辨率，为保证实验效果，大多实验室都使用现配的凝胶，这极大的制约了工作效率，并消耗了大量时间和人力，而且，市场上的预制胶绝大多数都不能用于脂蛋白亚型的精细分离。