[发明专利]一种小鼠肝脏原代细胞培养基、培养方法及培养箱

权利要求书

1.一种小鼠肝脏原代细胞培养基，其特征在于，配方为：

William’s E培养基，1％牛血清白蛋白，1nmol/L胰岛素，100nmol/L地塞米松，2mmol/LL-谷氨酰胺，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素。

2.一种小鼠肝脏原代细胞培养方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的小鼠肝脏原代细胞培养基进行培养。

3.根据权利要求2所述的小鼠肝脏原代细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将经原位灌注后获取的肝脏放于预冷的灌注液II中；

2)分离肝脏原代细胞，重悬于如权利要求1所述的小鼠肝脏原代细胞培养基中；

3)将肝脏原代细胞悬液接种于胶原处理过的培养装置，在37摄氏度，体积分数为5％的CO₂培养箱内培养，每隔5-7小时使用权利要求1所述的小鼠肝脏原代细胞培养基常规换液；

所述灌注液II配方为由不含钙离子的Kreb-Ringer’s磷酸盐缓冲液，0.1％葡萄糖，0.5mg/ml I型胶原酶，5mmol/L氯化钙，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素组成。

4.根据权利要求3所述的小鼠肝脏原代细胞培养方法，其特征在于，初始培养密度为1.2×10⁶/ml。

5.根据权利要求3所述的小鼠肝脏原代细胞培养方法，其特征在于，每隔6小时常规换液。

6.根据权利要求3所述的小鼠肝脏原代细胞培养方法，其特征在于，所述胶原处理过的培养装置其处理方法为：胶原蛋白用0.02mol/L醋酸稀释到50μg/ml后，在细胞操作橱中，向培养装置中加入胶原溶液；在室温下放置1-2小时后，将胶原溶液吸出，用PBS洗三遍；在细胞操作橱中通风过夜吹干。