[发明专利]一种快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法

权利要求书

1.一种快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将无菌的2-3周龄的落地生根外植体分别用侵染液A和侵染液B侵染处理5-10分钟，所述的侵染液A为野生型A4发根农杆菌，侵染液B为转入GUS报告基因的A4发根农杆菌；

（2）将侵染后的外植体置于无抗MS固体培养基上，黑暗条件下进行共培养24-48小时；

（3）将外植体转移到有抗MS固体培养基中进行共培养，2-3周以后外植体分化形成毛状根；

（4）剪下毛状根，在有抗MS固体培养基上进行筛选培养，两周以后筛选出生长速度快的落地生根毛状根；

（5）再在有抗MS固体培养基上进行继代培养，得到脱毒的落地生根毛状根；

（6）剪取毛状根，在MS液体培养基上进行扩大培养，得到大量的落地生根毛状根；

（7）用B侵染液诱导出的落地生根毛状根进行GUS染色探究转化效率。

2.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，步骤（1）中，所述侵染液A由50 ml OD 600值为0.8的农杆菌A4进行离心，用等体积MS液体进行重悬得到。

3.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（7）中，所述侵染液B由50 ml OD 600值为0.8带有GUS报告基因的农杆菌A4进行离心，用等体积MS液体进行重悬得到。

4.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，步骤（2）和步骤（3）中，所述共培养温度为25℃。

5.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，步骤（3）和步骤（4）中，所述有抗MS固体培养基为100 mg/ml头孢的MS固体培养基。

6.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，步骤（5）中，所述有抗MS固体培养基为含有50 mg/ml头孢的MS固体培养基。

7.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，，步骤（5）中，所述继代培养次数为2-3次。

8.根据权利要求1所述的快速高效的落地生根毛状根诱导和扩繁方法，其特征在于，步骤（4）和步骤（6）中，所述毛状根的剪取长度为2-3cm。