[发明专利]细胞外囊泡的分离方法、以及检测细胞外囊泡表面标志物的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种细胞外囊泡的分离方法，其特征在于，其包括：

将预处理后的生物样品与磷脂酰丝氨酸捕获分子-亲和标签融合蛋白混合孵育后，再加入能与所述磷脂酰丝氨酸捕获分子-亲和标签融合蛋白中的亲和标签特异性结合的固相载体，形成载体-细胞外囊泡复合物；

再将所述载体-细胞外囊泡复合物从所述生物样品中分离。

2.根据权利要求1所述的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于，所述磷脂酰丝氨酸捕获分子-亲和标签融合蛋白中的磷脂酰丝氨酸捕获分子包括乳粘素、含有乳粘素的C1和/或C2结构域的多肽、膜粘蛋白-V中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于，所述固相载体的表面偶联有能够与所述亲和标签特异性结合的亲和分子，所述亲和分子包括Protein A/G、亲和素、谷胱甘肽和Ni离子中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于，所述固相载体包括磁珠、碳纳米管和聚合物微球中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于，所述亲和标签包括IgGFc、Avi-tag、GST和六聚组氨酸中的任意一种。

6.一种细胞外囊泡表面标志物的检测方法，其特征在于，其包括：

将采用权利要求1～5任一项的分离方法得到的所述载体-细胞外囊泡复合物与偶联有荧光素酶的标志物抗体混合孵育，得到载体-细胞外囊泡-荧光素酶复合物；

裂解所述载体-细胞外囊泡-荧光素酶复合物，并加入所述荧光素酶的底物，检测所述荧光素酶催化的发光强度。

7.根据权利要求6所述的细胞外囊泡表面标志物的检测方法，其特征在于，所述偶联有荧光素酶的标志物抗体包括能够同时表达荧光素酶和标志物抗体的荧光素酶-抗体融合蛋白；

优选地，所述荧光素酶为Gaussia荧光素酶。

8.根据权利要求7所述的细胞外囊泡表面标志物的检测方法，其特征在于，所述荧光素酶-抗体融合蛋白中，所述荧光素酶与标志物抗体之间由柔性短肽连接；优选的，所述柔性短肽的氨基酸序列为(GGGGS)₂、(GGGGS)₃、G(SGGGG)₂S、(GGS)₄、(GSG)₄和A(EAAAK)₂A中的任意一种。

9.根据权利要求6所述的细胞外囊泡表面标志物的检测方法，其特征在于，所述标志物抗体是能够识别所述细胞外囊泡表面标志物的小分子抗体，所述标志物抗体包括单链抗体、纳米抗体或Fab片段。

10.一种用于检测细胞外囊泡表面标志物的试剂盒，其特征在于，其包括：荧光素酶-抗体融合蛋白、磷脂酰丝氨酸捕获分子-亲和标签融合蛋白以及固相载体。