[发明专利]一种肺癌干细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种肺癌干细胞的制备方法，其特征在于，其制备方法为：

步骤1)：配制羧甲基纤维素钠的无血清DMEM/F12培养基A；其中，培养基A中羧甲基纤维素钠和无血清DMEM/F12培养基的质量体积比为0.125％-0.25％；

步骤2)：包括步骤A或步骤B；

步骤A为:用培养基A把肺癌细胞制成单细胞悬液A，再向单细胞悬液A中加入维持肺癌干细胞干性的物质,得到混合液，将混合液在3D细胞培养条件下培养7天以上即可；

步骤B为:将维持肺癌干细胞干性的物质加到上述培养基A中，得到培养基B,用培养基B把肺癌细胞制成单细胞悬液B，再将单细胞悬液B在3D细胞培养条件下培养7天以上即可；所述肺癌细胞来自于含有肺癌细胞的肺癌细胞系或者肺癌组织；所述维持肺癌干细胞干性的物质为EGF和bFGF及B27的混合物。

2.如权利要求1所述的肺癌干细胞的制备方法，其特征在于，步骤2)中的培养是在超低粘附装置上培养的；培养时间为7-21天。

3.如权利要求1所述的肺癌干细胞的制备方法，其特征在于，所述单细胞悬液A中肺癌细胞的浓度为(10⁴-10⁵)个肺癌细胞/毫升；所述单细胞悬液B中肺癌细胞的浓度为(10⁴-10⁵)个肺癌细胞/毫升。

4.如权利要求1所述的肺癌干细胞的制备方法，其特征在于，步骤A向单细胞悬液A中加入维持肺癌干细胞干性的物质时，B27的体积与单细胞悬液A的体积比为1：50；混合液中EGF的浓度为20ng/mL，bFGF浓度为20ng/mL；步骤B中，将维持肺癌干细胞干性的物质加到上述培养基A中时，B27的体积与培养基A的体积比为1：50；培养基B中EGF的浓度为20ng/mL；bFGF的浓度为20ng/mL。

5.如权利要求1所述的肺癌干细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的培养是在37℃，5％CO₂饱和湿度的条件下进行体外培养的。

6.如权利要求1所述的肺癌干细胞的制备方法，其特征在于，步骤2)培养7天以上后，还进行了离心操作得到干细胞的步骤。

7.一种对权利要求1-5任意一项所述的肺癌干细胞进行药物干预或基因操作的方法，其特征在于，其方法为：当需要使用药物对肺癌干细胞进行干预时，在步骤1)的含羧甲基纤维素钠的无血清DMEM/F12培养基中还加入了所述药物；当需要对肺癌干细胞进行基因操作时，先将肺癌细胞在2D细胞培养条件下操作完成，再进行步骤1)的步骤。