[发明专利]一种肺癌干细胞的制备方法及应用

说明书

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种肺癌干细胞的制备方法及应用。该肺癌干细胞的制备方法为：步骤1)：配制含羧甲基纤维素钠的无血清DMEM/F12培养基A；其中，培养基A中羧甲基纤维素钠和无血清DMEM/F12培养基的质量体积比为0.25％以下；步骤2)：用培养基A把肺癌细胞制成单细胞悬液A，再向单细胞悬液A中加入维持肺癌干细胞干性的物质,得到混合液，将混合液在3D细胞培养条件下培养7天以上即可；或将维持肺癌干细胞干性的物质加到上述培养基A中，得到培养基B,用培养基B把肺癌细胞制成单细胞悬液B，再将单细胞悬液B在3D细胞培养条件下培养7天以上即可。本发明制备方法简单，高效稳定，肺癌干细胞干性高。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种肺癌干细胞的制备方法及应用。

背景技术

肺癌干细胞对肺癌的存活、增殖、转移及复发有着重要作用。肺癌干细胞通过自我更新和无限增殖维持着肿瘤细胞的生命力，肺癌干细胞的运动和迁徙能促使肿瘤细胞的转移，肺癌干细胞可以长时间处于休眠状态并具有多种耐药分子而对杀伤肿瘤细胞的药物不敏感。肺癌干细胞已成为当前肿瘤研究的热点。通过培养肿瘤干细胞可以对其生物学特性如异质性、肿瘤的演化、转移和抗药性等进行研究，为肿瘤的早期诊断与治疗提供了新的思路和策略。肺癌干细胞的体外培养在肿瘤干细胞研究领域具有不可替代的重要地位。

肺癌干细胞的体外培养方法一般为肺癌细胞系或者是临床肺癌组织联合采用机械和胶原酶消化肿瘤组织得到单细胞悬液，经过流式细胞仪或者免疫磁珠分选的方法得到肺癌干细胞。

将肺癌细胞系或者是临床肺癌组织进行体外培养，并加入细胞因子联合培养以防止其分化，这种培养方法在贴壁培养的条件下所得的肺癌干细胞占有比例小，在肺癌组织中肺癌干细胞占有的比例就更少。用3D胶(Basement Membrane Extract(BME)，fibrinogen， I collagen，Marigel胶)培养的方法能提高肺癌细胞的干性，在体外可以培养出肺癌干细胞，但是培养完成之后需要用分离酶把细胞从3D胶中洗脱，分离酶的使用对细胞是一种伤害，对肺癌细胞的干性也有影响，最终会导致实验结果的不稳定。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种高效稳定，细胞干性高且制备方法简单的肺癌干细胞制备方法，并提供了该肺癌干细胞的应用方法。

为了实现本发明的技术效果，采用了以下技术方案予以实现：

一种肺癌干细胞的制备方法，其制备方法为：

步骤1)：配制含羧甲基纤维素钠的无血清DMEM/F12培养基A；其中，培养基A中羧甲基纤维素钠和无血清DMEM/F12培养基的质量体积比为0.25％以下；

步骤2)：包括步骤A或步骤B；

步骤A为:用培养基A把肺癌细胞制成单细胞悬液A，再向单细胞悬液A中加入维持肺癌干细胞干性的物质,得到混合液，将混合液在3D细胞培养条件下培养7天以上即可；

步骤B)为:将维持肺癌干细胞干性的物质加到上述培养基A中，得到培养基B,用培养基B 把肺癌细胞制成单细胞悬液B，再将单细胞悬液B在3D细胞培养条件下培养7天以上即可。

作为进一步的改进，培养基A中羧甲基纤维素钠和无血清DMEM/F12培养基的质量体积比为0.125％-0.25％。

作为进一步的改进，步骤2)中的培养是在超低粘附装置上培养的；培养时间为7-21 天。

作为进一步的改进，所述肺癌细胞来自于含有肺癌细胞的肺癌细胞系或者肺癌组织。