[发明专利]一种狂犬病疫苗病毒的传代培养方法、狂犬病疫苗的制备方法有效
| 申请号： | 201910035716.8 | 申请日： | 2019-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN109666653B | 公开（公告）日： | 2022-10-04 |
| 发明（设计）人： | 袁若森;姜春来;杨旭;张洁琼;曾智;万铁军;何欣;魏巍;汤鑫;原秀娟;卢井才;张岩 | 申请（专利权）人： | 吉林惠康生物药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;A61K39/205;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 130000 吉林*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 狂犬病 疫苗 病毒 传代 培养 方法 制备 | ||
1.一种狂犬病疫苗病毒的传代培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：将狂犬病毒毒株按超高MOI 1000接种到人二倍体细胞感染吸附，加培养液培养，获得第一代病毒P1；
步骤2：将P1按超低MOI 0.00001接种到人二倍体细胞感染吸附，加生长液培养，弃去生长液，加培养液继续培养，获得第二代病毒P2；
步骤3：将P2按超高MOI 100接种到人二倍体细胞感染吸附，加培养液培养，获得第一代病毒P3；
步骤4：将P3按超低MOI 0.0001接种到人二倍体细胞感染吸附，加生长液培养，弃去生长液，加培养液继续培养，获得第二代病毒P4；
步骤5：将P4按超高MOI 10接种到人二倍体细胞感染吸附，加培养液培养，获得第一代病毒P5；
步骤6：将P5按超低MOI 0.001接种到人二倍体细胞感染吸附，加生长液培养，弃去生长液，加培养液继续培养，获得第二代病毒P6；
步骤7：将P6按超高MOI 1接种到人二倍体细胞感染吸附，加培养液培养，获得第一代病毒P7；
步骤8：将P7按超低MOI 0.01接种到人二倍体细胞感染吸附，加生长液培养，弃去生长液，加培养液继续培养，获得第二代病毒P8；
步骤9：收集P6或P8代病毒；
步骤1、3、5、7中，所述感染吸附的温度为30-38℃，所述感染吸附的时间为0.25-2h；所述培养的温度为30-38℃，所述培养的时间为2-6d；
步骤2、4、6、8中，所述感染吸附的温度为30~38℃，所述感染吸附的时间为10-30min；所述加生长液培养的温度为30~38℃，培养时间为2~4d；所述继续培养的温度为30-38℃，培养时间为4~6d；
所述狂犬病毒毒株为PM株、CTN株或aG株；
所述人二倍体细胞为MRC-5细胞或2BS细胞。
2.根据权利要求1所述的传代培养方法，其特征在于，步骤1~8中，所述培养液为含1%海藻糖的2%胎牛血清MEM培养液。
3.根据权利要求1所述的传代培养方法，其特征在于，步骤2、4、6、8中，所述生长液为10%胎牛血清。
4.一种狂犬病疫苗的制备方法，其特征在于，将权利要求1~3任一项所述传代培养方法获得的狂犬病毒进行扩大培养后纯化，制得狂犬病疫苗。
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