[发明专利]一种高纯度肝素钠的制备工艺

说明书

本发明公开了一种高纯度肝素钠的制备工艺，具体包括以下步骤：S1、酶解盐解除蛋白：将10‑12倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0‑60.0℃，S2、一次氧化，S3、沉淀，S4、二次氧化，S5、再次沉淀，S6、冷冻干燥，本发明涉及医药技术领域。该高纯度肝素钠的制备工艺，可实现通过采取酶解盐解一体式解离方式，在高温解离过程中，保护肝素不受破坏，运用不同浓度乙醇除去不同杂质，在氧化过程中，加入无水碳酸钠和无水硫酸钠，以特定比例配制，解决了现有肝素钠精制时因对肝素钠结构产生破坏而难以得到高纯度的肝素钠的问题，同时运用HPLC方法，对各步骤中去除的杂质进行检测，操作简单，产品收率高，更有效的控制成品质量。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体为一种高纯度肝素钠的制备工艺。

背景技术

肝素广泛存在于哺乳动动的内脏和肠粘膜中，主要由D-葡糖胺，L-艾杜糖醛酸，M-乙酰葡萄糖胺及D-葡糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，作为一种天然抗凝血物质，在抗凝血、促进质蛋白酶释放和补体溶细胞体系等方面具有良好的活性，广泛用于流行性脑炎、败血症、血栓塞、急性心肌梗塞、动脉硬化等治疗，肝素易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，分子结构单元中含有5个硫酸基和2个羟基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子发生反应生成盐，由于肝素在动物体中主要以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在，故使得目前动物体中提取的粗品肝素钠中残留一定量的蛋白质，对肝素钠的活性产生一定影响。

目前肝素的精制过程主要是对粗品肝素钠进行除蛋白、核酸等物质提纯和脱色，达到国家药典标准要求，国内外发表了许多除肝素中丝氨酸的方法，但是均需分离特定分子量的肝素片段，然后除去特定肝素片段的丝氨酸残基，无法达到工业化生产要求，而现有肝素提取纯化方法大多采取酸碱处理去除杂质蛋白、核酸等物质，采用高锰酸钾氧化和过氧化氢氧化去除色素类物质，但是高锰酸钾氧化法会产生二氧化锰吸附肝素的问题，使肝素活性损失大，导致肝素钠回收率低、色泽差，过氧化氢氧化法，因产品色泽较好，目前被广泛应用，但由于现有技术对氧化剂加入量及反应条件难以控制，往往在实际生产中会加入过量的氧化剂，而反应条件也不适宜，最终对肝素钠结构的破坏，使其收率低，活性低，难以得到较高纯度的精品肝素钠产品。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种高纯度肝素钠的制备工艺，解决了现有肝素钠精制时因对肝素钠结构产生破坏而难以得到高纯度的肝素钠，易对肝素钠结构造成破坏，使其收率低，活性低的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种高纯度肝素钠的制备工艺，具体包括以下步骤：

S1、酶解盐解除蛋白：将10-12倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至 50.0-60.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％-5.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解至少1小时，溶解完毕后，将料液温度降至 35.0-45.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0-45.0℃，用氢氧化钠溶液调节pH值至7-9，保温酶解反应3.0-5.0小时，加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的亚硫酸氢钠，升温至50.0-70.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0-90.0℃，保温反应30-60分钟，加入无水碳酸钠，保温搅拌反应30-60分钟后过滤，用HPLC法对过滤去除杂质进行检测分析；

S2、一次氧化：调节滤液温度至25.0-40.0℃，用4mol/L氢氧化钠溶液调节料液pH值至10-11，再加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的无水硫酸钠，按料液体积的2.0％加入氯化钠，加入料液体积2.0％的过氧化氢氧化 12-18h；