[发明专利]一种外泌体的制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种外泌体的制备方法及应用，所述方法至少包括以下步骤：采用差速离心法对类器官的培养上清液进行处理，分离得到所述外泌体。本发明所述的制备方法可高效分离和提纯所述外泌体，所述类器官外泌体既能够保留原位组织的特征，又可以提供细胞间、组织细胞与胞外基质的信息，类器官外泌体可以提供更为靶向的、更为全面的原位组织的特质，有利于研究对癌细胞之间以及癌细胞与细胞质基质的了解，推动癌症的治疗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种外泌体的制备方法及应用。

背景技术

外泌体是由大多数细胞分泌的，直径约为30-150纳米，具有脂质双层膜结构的微小膜泡，其包含特异性蛋白质、脂质和核酸。外泌体不仅在干细胞分化和维持、组织修复和组织再生、免疫系统、妊娠中胚胎着床和胎盘发育、生殖等重要生理活动中扮演角色，同时在心血管疾病、神经退行性疾病、癌症等病理活动中也发挥作用。

外泌体在肿瘤的增殖和转移等过程中扮演重要角色。外泌体在癌症中，主要有调节肿瘤免疫反应、调节肿瘤微环境再编程和参与肿瘤转移三个方面的功能。已有研究中，外泌体多来源于细胞培养基或血清、血浆等体液，不能保留患者原位组织的特征，无法提供细胞间、组织细胞与胞外基质的信息。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种外泌体的制备方法及应用，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种外泌体的制备方法，至少包括以下步骤：

采用差速离心法对类器官的培养上清液进行处理，分离得到外泌体。

进一步的，所述制备方法至少包括5次离心。

进一步的，所述制备方法至少包括以下步骤：

1)离心去除活细胞；

2)离心去除死细胞；

3)离心去除细胞碎片；

4)离心去除囊泡结构；

5)离心得到外泌体。

进一步的，所述制备方法至少包括以下步骤：

1)去除活细胞：对类器官培养上清进行离心，离心条件为4℃，300g-500g，10分钟，得到上清液1和沉淀1；

2)去除死细胞：对上清1进行离心，离心条件为4℃，2,000g，10-20分钟，得到上清液2和沉淀2；

3)去除细胞碎片：对上清2进行离心，离心条件为4℃，10,000g，20-30分钟，得到上清液3和沉淀3；

4)去除囊泡结构：对上清3进行离心，离心条件为4℃，100,000g，70-120分钟，得到上清液4和沉淀4；

5)得到外泌体：对上清4进行离心，离心条件为4℃，100,000g，70-120分钟，得到上清液5和沉淀5；

所述沉淀5即为所述外泌体。

在一种实施方式中，所述制备方法至少包括以下步骤：

1)对类器官培养上清进行离心，离心条件为4℃，500g，10分钟，得到上清液1和沉淀1；

2)对沉淀1进行离心，离心条件为4℃，2 000g，20分钟，得到上清液2和沉淀2；

3)对沉淀2进行离心，离心条件为4℃，10 000g，30分钟，得到上清液3和沉淀3；

4)对沉淀3进行离心，离心条件为4℃，100 000g，120分钟，得到上清液4和沉淀4；