[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法

权利要求书

1.一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，包括：

步骤50、将样品提取液加入到检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中反应后，所得的产物用洗涤液进行磁场清洗，然后加入A液和B液进行反应，再加入终止液停止反应；步骤51、用所述检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中黄曲霉素B1标准比色卡进行比对，得到待测样品黄曲霉素B1的含量或范围值；

其中，所述试剂盒内盛装通过铂金二氧化硅纳米微球结合适配体DNA互补链制备的铂金二氧化硅纳米微球信号标签，以及通过四氧化三铁纳米微球结合适配体DNA链制备的四氧化三铁纳米微球捕获剂的混合溶液；

制备所述铂金二氧化硅纳米微球信号标签包括：

步骤10、将四氯金酸和柠檬酸三钠用去离子水定容后加入硼氢化钠溶液搅拌后获得金纳米粒子，将所述金纳米粒子离心洗涤后分散在水中，得到金纳米粒子溶液；

步骤11、将三乙胺加入水搅拌后，加入十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸，正硅酸乙酯反应后，再加入盐酸甲醇溶液反应，取以上配置而成的部分溶液加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，搅拌后得到氨基化二氧化硅纳米微球，将所述氨基化二氧化硅纳米微球离心清洗取沉淀后分散在水中，得到氨基化二氧化硅纳米微球溶液；

步骤12、将所述氨基化二氧化硅纳米微球加入所述金纳米粒子溶液，超声搅拌反应，得到红色的金二氧化硅纳米微球；

步骤13、将所述红色的金二氧化硅纳米微球离心洗涤后分散在水中，得到红色的金二氧化硅纳米微球溶液，在所述红色的金二氧化硅纳米微球溶液中加入氯铂酸后搅拌再加入硼氢化钠溶液反应，获得铂金二氧化硅纳米微球，分散到水中，得到铂金二氧化硅纳米微球溶液；

步骤14、取戊二醛原液加入到所述铂金二氧化硅纳米微球溶液孵育，将反应所得的溶液离心洗涤，分散到水中，得到戊二醛修饰过的铂金二氧化硅纳米微球溶液，再加入氨基化修饰的适配体DNA互补链并搅拌，获得所述铂金二氧化硅纳米微球信号标签；

制备所述四氧化三铁纳米微球捕获剂具体包括：

步骤20、取戊二醛原液加入到四氧化三铁纳米微球溶液中并在室温下孵育；反应所得的戊二醛修饰过的四氧化三铁纳米微球溶液离心洗涤，分散到水中；加入氨基化修饰的适配体DNA链并在室温下搅拌反应，得到的溶液用磁场洗涤获得所述四氧化三铁纳米微球捕获剂。

2.如权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于：

所述步骤50中，所述的将样品提取液加入到检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中反应是指在室温下反应，其反应时间为40～60min；所述的磁场清洗次数至少为3次；所述的加入所述A液和所述B液进行反应的反应时间为10～40min。

3.如权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，在所述步骤50之前还包括：

步骤011、将固体样品去皮粉碎，加入甲醇水溶液和石油醚，振荡，用滤纸过滤于分液漏斗中，静置分层，下层为固体样品的样品提取液；

或，

步骤021、称取液体样品于小烧杯中，用蒸馏水转移到分液漏斗中，加入三氯甲烷，加塞轻轻振摇，静置分层，然后放出下层三氯甲烷层，经盛有约预先用三氯甲烷湿润的无水Na₂SO₄的快速定性滤纸过滤于蒸发皿中，再加三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，水溶通风挥干；挥干冷却后，用甲醇溶解得液体样品的样品提取液。

4.如权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，在所述步骤50之前还包括：

步骤03、称取磷酸二氢钾，十二水合磷酸氢二钠，氯化钠和氯化钾，将称量的药品倒入烧杯中加水溶解，然后加入吐温20，将配制的溶液转移至容量瓶中，加蒸馏水定容后得到所述洗涤液；

步骤04、称取醋酸钠、柠檬酸，然后加入双氧水定容，则得到所述A液；

步骤05、取3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶于二甲基亚砜，后加入乙二胺四乙酸二钠，柠檬酸和甘油，用超纯水或蒸馏水或去离子水定容得到所述B液；

步骤06、量取蒸馏水于试剂瓶中，缓慢加入浓硫酸，静置超声混匀，得到所述终止液。