[发明专利]检测D二聚体的电化学试剂盒及其制备方法

说明书

本发明采用金纳米粒子和3,4乙烯二氧噻吩(EDOT)为基底材料，通过Au‑NH₂将抗体连接到基底材料表面，利用抗原抗体的特异性结合前后引起的电极表面导电性的变化引起电流信号的差异，实现对D‑二聚体的特异性检测，增强了传感器的灵敏度，有效降低了传感器的检出限，实现了对D‑二聚体的灵敏检测，该方法具有制备简单、重现性好、灵敏度高和特异性好等优点，有效克服了目前检测D‑二聚体方法的不足。

技术领域

本发明涉及新型生物传感检测技术领域，具体的说是一种采用印刷电极的检测方法，利用D二聚体抗原抗体结合前后引起电极表面导电能力的不同而产生的信号强度的差异，来判断待测样品中D二聚体抗原的含量，从而实现对D二聚体的灵敏检测的一种检测D二聚体的电化学试剂盒及其制备方法。

背景技术

D-二聚体(D-Dimer):是纤维酶水解交联纤维蛋白形成的降解产物之一，为继发性纤维所特有的代谢产物。其含量变化可以作为体内高凝状态和作为原发性与继发性纤维鉴别的可靠指标。D-二聚体是辅助诊断或排除血栓疾病的重要标志，又是指导溶栓药物剂量应用的关键数据。因此，对于D-二聚体的准确检测可以实现对疾病的早期诊断和治疗。

目前检测D-二聚体的的方法有很多，但大多都操作较为复杂，易产生假阳性或假阴性信号。印刷电极，因其导电性好、重现性好、成本低、便于小型化实现在线检测等特点，能够适用于不同环境下的在线检测，减少了应用其他方法复杂的操作造成的不确定因素，因此，基于印刷电极的检测能达到良好的效果。

免疫传感器是利用抗原(抗体)对抗体(抗原)的识别功能而研制成的生物传感器。通过抗原抗体之间的特异性结合，使得传感器具有很高的选择性和灵敏度等优点。

发明内容：

本发明针对现有技术中存在的缺点和不足，提出了一种基于金纳米颗粒和3,4-乙烯二氧噻吩(EDOT)为基底材料，利用金纳米颗粒良好的生物相容性构建了一种特异性强、灵敏度高的检测D二聚体的电化学试剂盒及其制备方法。

本发明可以通过以下措施达到：

一种检测D二聚体的电化学试剂盒，其特征在于自下而上依次设有基座、电极层、上盖，其中基座上开设用于安装电极的限位槽，所述限位槽的轮廓为具有一个缺口的圆环形；所述电极层呈一端具有圆形膨大部的长条状，圆形膨大部的外径小于等于基座上限位槽的内径，条形部的宽度小于等于限位槽的缺口宽度，所述电极层设有PET基层，PET基层上设置工作电极、参比电极和对电极，其中工作电极为圆形且位于圆形膨大部的中心，参比电极和对电极为等径的弧形，参比电极和对电极设置在工作电极外侧，工作电极、参比电极、对电极分别经银导线向外输出信号且位于条形部的PET基层上；所述上盖上开设样品加样孔，样品加样孔的下侧沿样品加样孔设置环形凸台，且环形凸台的下端面上开设与限位槽相嵌合的卡槽，上盖的样品加样孔经卡槽与基座上的限位槽嵌合；所述工作电极上修饰D二聚体抗体。

本发明中基座呈条形，限位槽设置在基座的一端，基座的另一端设置检测插口，电极层的条形部的末端与检测插口相连，上盖也呈条形，基座内壁和上盖内壁可以对应设有相配合的扣槽和卡扣，便于上盖与基座扣合为一体。

本发明中所述电极层的PET基层厚度为0.3mm，工作电极通过丝网印刷印刷配置，工作电极的直径为3mm，银导线以及对电极、参比电极带宽为1mm。

本发明使用辰华电化学工作站进行测试，所制备的印刷电极为工作电极，将样品滴加到样品槽，进行孵化使抗体与基底材料结合，孵化时间为5-25min，优选为孵化10分钟，移走样品后，将电极浸入到铁标([Fe(CN)₆]^3-/4-)溶液中进行测试；用差分脉冲伏安法对D-二聚体进行检测，其电压测试范围为-0.2～0.6V；测量抗体抗原结合前后的传感器的峰电流值，然后记录电流的变化，绘制工作曲线。