[发明专利]一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法

权利要求书

1.一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，其特征在于：血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以伊马替尼-d8为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5uL的2ng/uL的内标伊马替尼-d8溶液，混匀后加入1000uL的混合有机溶剂Ⅰ，混合有机溶剂Ⅰ为乙腈：甲酸按照体积比99：1混合得到的混合物，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液20uL至装有1000uL混合有机溶剂Ⅱ的96深孔板中，混合有机溶剂Ⅱ为甲醇：水：甲酸：1mol/L的醋酸铵按照体积比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；

(2)试样测定：

取10uL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中伊马替尼和内标伊马替尼-d8的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的伊马替尼浓度；

(3)液相色谱测定，条件为：

色谱柱：RestekAllure PFPP，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸/1mol/L的醋酸铵的体积比为100/0.3/0.5；流动相B：乙腈/水/甲酸/1mol/L的醋酸铵的体积比为98/2/0.3/0.5；洗液：甲醇/甲酸的体积比为99/1；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间4min；

(4)质谱测定，条件为：

离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为4000V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为15Psi，辅助加热气压力为15Psi，气帘气压力为35Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为50eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；碰撞室入口电压分别为8eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；碰撞电压分别为35eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；碰撞室出口电压分别为20eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；正离子方式检测；扫描方式为多反应监测MRM；

用于定量分析的离子反应分别为：m/z494.3→m/z394.0，其为伊马替尼；和m/z502.3→m/z393.5，其为伊马替尼-d8。

2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，其特征在于：所述步骤(3)中梯度洗脱的程序为：

3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以伊马替尼和内标伊马替尼-d8的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样品中的伊马替尼的浓度。

4.根据权利要求3所述的一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，其特征在于：所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：

取100uL空白血浆10份置于96深孔板中，以贮备液的形式添加5uL浓度分别为0.2ng/μL、0.4ng/μL、1ng/μL、2ng/μL、10ng/μL、20ng/μL、40ng/μL、100ng/μL的伊马替尼溶液至最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样本中，分别加入5uL的体积比为1：1的甲醇水溶液至空白样本和零浓度样本，混匀后分别向最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样本、零浓度样本中加入5uL的2ng/uL的内标伊马替尼-d8溶液，向空白样本中加入5uL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后分别向10份样本中加入1000uL的混合有机溶剂Ⅰ，混合有机溶剂Ⅰ为乙腈：甲酸按照体积比99：1混合得到的混合物，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，分别取上层清液20uL至装有1000uL混合有机溶剂Ⅱ的96深孔板中，混合有机溶剂Ⅱ为甲醇：水：甲酸：1mol/L的醋酸铵按照体积比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为10份标准样品待检测；

分别取10uL标准样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中的伊马替尼和内标伊马替尼-d8的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的伊马替尼的浓度。