[发明专利]一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为伊马替尼的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为10～5000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中伊马替尼的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法。

背景技术

伊马替尼(Imatinib)是一种用于治疗费城染色体(Ber－Abl)阳性的慢性骨髓性白血病(简称CML)成人患者的急变期、加速期和干扰素治疗失败后的慢性期的口服药物。CML是一种由于骨髓中干细胞的DNA异常而引起的造血干细胞疾病。DNA异常会产生异常蛋白质，干扰骨髓中白细胞正常生成过程，最终导致白细胞数目的急剧增加。CML分为慢性期、加速期和危象期三个阶段，危象期患者的平均存活肘间只有2～3个月。伊马替尼对胃肠道间质瘤治疗也有效，有效率在50％左右，是一种具有良好开发前景的药源化合物，其结构式如下：

目前，现有关于伊马替尼测定方法的速度、精度和灵敏度均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中伊马替尼浓度的方法，该方法可提高检测的速度、精度和灵敏度。

为实现上述目的，一种测定血浆中伊马替尼浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以伊马替尼-d8为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5uL的2ng/uL的内标伊马替尼-d8溶液，混匀后加入1000uL的混合有机溶剂Ⅰ，混合有机溶剂Ⅰ为乙腈：甲酸按照体积比99：1混合得到的混合物，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液20uL至装有1000uL混合有机溶剂Ⅱ的96深孔板中，混合有机溶剂Ⅱ为甲醇：水：甲酸：1mol/L的醋酸铵按照体积比85：15：0.3：0.5混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；

(2)试样测定：

取10uL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中伊马替尼和内标伊马替尼-d8的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的伊马替尼浓度；

(3)液相色谱测定，条件为：

色谱柱：Restek Allure PFPP，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸/1mol/L的醋酸铵的体积比为100/0.3/0.5；流动相B：乙腈/水/甲酸/1mol/L的醋酸铵的体积比为98/2/0.3/0.5；洗液：甲醇/甲酸的体积比为99/1；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间4min；

(4)质谱测定，条件为：

离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为4000V，雾化温度为500℃喷雾气压力为15Psi，辅助加热气压力为15Psi，气帘气压力为35Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为50eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；碰撞室入口电压分别为8eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；碰撞电压分别为35eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；碰撞室出口电压分别为20eV的伊马替尼和伊马替尼-d8；正离子方式检测；扫描方式为多反应监测MRM；用于定量分析的离子反应分别为：m/z494.3→m/z394.0，其为伊马替尼；和m/z502.3→m/z393.5，其为伊马替尼-d8。