[发明专利]一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为吡嗪酰胺的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～20μg/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中吡嗪酰胺的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法。

背景技术

结核病是威胁人类健康的重大传染病，目前用于一线治疗的药物有吡嗪酰胺、异烟肼、利福平和乙胺乙醇。其中，吡嗪酰胺为白色或类白色结晶性粉末，无臭或几乎无臭，味微苦，在水中略溶，在乙醇中极微溶解。熔点为188～192℃，对人型结核杆菌有较好的抗菌作用，在pH5～5.5时，杀菌作用最强。在人体内抑菌浓度12.5μg/ml，达50μg/ml可杀灭结核杆菌。作用机制与吡嗪酸有关，吡嗪酰胺渗透入吞噬细胞后并进入结核杆菌菌体内，菌体内的酰胺酶使其脱去酰胺基，转化为吡嗪酸而发挥抗菌作用。另因吡嗪酰胺在化学结构上与烟酰胺相似，通过取代烟酰胺而干扰脱氢酶，阻止脱氢作用，妨碍结核杆菌对氧的利用，而影响细菌的正常代谢，造成死亡。吡嗪酰胺只对结核杆菌有杀灭作用，对其他细菌无抗菌活性，其结构式如下：

目前，尚未关于吡嗪酰胺测定方法的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法，该方法可提高检测的速度、精度和灵敏度。

为实现上述目的，一种液质联用测定血浆中吡嗪酰胺浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

以K₂EDTA为抗凝剂，以吡嗪酰胺-d3为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积比为1：1的乙腈水溶液，混匀后加入5uL的0.01ug/uL的内标吡嗪酰胺-d3溶液，混匀后加入1000uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液50uL至装有1000uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为水：甲醇：甲酸按照体积比95：5：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；

(5)试样测定：

取10uL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中吡嗪酰胺和内标吡嗪酰胺-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的吡嗪酰胺浓度；

(6)液相色谱条件：

色谱柱：Synergi^TM 4um Polar-RP 80A，柱规格为50×2mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积比为100/0.1；流动相B：甲醇/甲酸的体积比为100/0.1；洗液：乙腈/水的体积比为50/50；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；

(7)质谱条件：

离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为4500V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为30Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为20eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺-d3；碰撞室入口电压分别为13eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺-d3；碰撞电压分别为25eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺-d3；碰撞室出口电压分别为8eV的吡嗪酰胺和吡嗪酰胺-d3；正离子方式检测；扫描方式为多反应监测MRM；