[发明专利]一种全细胞一步合成L-肌肽的方法有效
| 申请号： | 201910040717.1 | 申请日： | 2019-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN109609536B | 公开（公告）日： | 2020-12-08 |
| 发明（设计）人： | 朱益波;王志杰;孙启武;赖淑涵;彭鑫成;楚银凤 | 申请（专利权）人： | 常熟理工学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/54;C12P17/10 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 滕诣迪 |
| 地址： | 215500 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 一步 合成 方法 | ||
1.一种全细胞一步合成L-肌肽的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）构建重组载体，所述重组载体含有核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸脂酰基转移酶基因，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
（2）将核苷酸序列SEQ ID NO.1所示的基因转入大肠杆菌获得重组大肠杆菌；
（3）将底物β-丙氨酸甲酯以及L-组氨酸溶于缓冲溶液，pH值为7.5-9.5；
（4）将重组大肠杆菌加入缓冲溶液中进行反应，反应温度25-42℃。
2.根据权利要求1所述的一种全细胞一步合成L-肌肽的方法，其特征在于：在所述步骤（1）、（2）中，将已知的氨基酸脂酰基核苷酸序列经密码子优化后通过基因合成获得编码21-619位氨基酸的基因片段SEQ ID NO.1，该片段5’、3’两端分别添加MscI和XhoI酶切位点；将合成基因片段和表达载体分别经MscI和XhoI酶切后，胶回收目的片段，目的片段经连接，连接产物转化大肠杆菌,在LB培养基上过夜培养，挑取单菌落培养后，获得重组大肠杆菌。
3.根据权利要求2所述的一种全细胞一步合成L-肌肽的方法，其特征在于：所述表达载体为pET22b载体。
4.根据权利要求2所述的一种全细胞一步合成L-肌肽的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
5.根据权利要求1所述的一种全细胞一步合成L-肌肽的方法，其特征在于：所述氨基酸脂酰基转移酶来源于鞘氨醇杆菌属。
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