[发明专利]油茶良种赣兴46的特征性核苷酸序列、特异性引物及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种油茶良种赣兴46的特征性核苷酸序列、特异性引物及鉴定方法。该特征性核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该特异性引物包括上游引物：5’‑GACTGCGTACGAATTCAAGAGGTGGT‑3’和下游引物：5’‑GAGTCCAAACCGGATAACAAAGACGT‑3’。本发明的特异性引物可对赣无系列油茶良种赣兴46进行快速的早期鉴别，具有简单、快捷、准确等特点，是表观特征辨别油茶良种所不能替代的分子手段。

技术领域：

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及油茶良种赣兴46的特征性核苷酸序列、特异性引物及鉴定方法。

背景技术：

油茶(Camellia oleifera)是我国南方重要的木本油料树种，与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料植物。其主产品茶油富含多不饱和酸，是优质的保健食用油，被称之为东方的橄榄树。

目前，我国油茶林总面积达5000多万亩，但产量仍然很低，平均每亩产茶油仅4公斤左右。其根本原因是绝大部分林地为低产油茶林，品种质量差，国家和省级审(认)定的优良品种没有及时得到推广应用，此外，一些地方良种意识淡薄、良种推广力度不高，加上经营管理粗放。因此，加快油茶优良种的推广及配套栽培管理力度。是保障油茶产业又好又快发展的关键。

目前我国对油茶种苗质量的监督管理，主要依靠管理层面制定的各项制度，而在技术层面尚未取得关键性突破，特别是缺乏油茶良种的早期快速鉴别技术体系。目前通过国家林木良种审定的18个赣无系列品种分别为赣无1号、赣无2、赣永5、赣永6、赣8、赣无11、赣无12、赣抚20、赣无24、赣兴46、赣兴48、赣70、赣石83-1、赣石83-4、赣石84-3、赣石84-8、赣190、赣447。这些油茶良种具有早实丰产、稳产、抗性强、适应性广等特点。对油茶种苗质量的监督管理要着力解决目前生产上油茶种苗的混乱局面，并首先从技术层面上对赣无系列油茶良种进行鉴别保护。

目前对油茶品种的鉴别主要依据表观特征，但由于油茶良种的形态性状较相似，形态鉴定较困难，并且许多形态性状鉴定的周期长、受环境影响大，并且随着品种数量不断增多，使得品种鉴定愈来愈困难。自20世纪以来，一些基于PCR的分子标记技术如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)、ISSR(Inter-SimpleSequence Repeat，简单序列重复区间扩增多态性)和SRAP(sequence-related amplifiedpolymorphism，相关序列扩增多态性)相继用于了油茶的种质资源遗传多样性等研究，但对于分子标记与油茶性状的连锁、油茶品种间的分子鉴别研究很少。况且，这些分子标记技术所采用的均为通用引物，其PCR 扩增图谱不仅复杂、重复性差，而且特异性不高，因此并不适合用于品种鉴别，只有开发出某个品种稳定、特异的DNA指纹标记才能真正用于该品种的准确快速鉴定。

发明内容：

本发明的目的是提供油茶良种赣兴46的特征性核苷酸序列、特异性引物及鉴定方法。

本发明经过大量筛选试验获得油茶良种赣兴46的特异性DNA片段，发明人据此设计并制备了用于快速鉴定油茶良种赣兴46的特异性引物，以该特异性引物对油茶良种进行PCR 扩增，仅赣兴46可稳定获得441bp大小的特异性片段(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，而其他油茶品种均不能获得该特异性片段。需要说明的是，本发明的特异性引物仅限于油茶良种的鉴别(鉴别其是否为赣兴46)，即待测样品仅限于油茶。

本发明方法关键在于特征性核苷酸序列和扩增引物的选择，DNA提取、PCR反应体系及反应条件确定，以及电泳检测，均可按照本领域常规方法进行。

因此，本发明的第一个目的是提供一种快速鉴定油茶良种赣兴46的特征性核苷酸序列，所述的特征性核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供一种快速鉴定油茶良种赣兴46的特异性引物，所述的特异性引物包括：