[发明专利]重组人永生化角质形成细胞系及其制备方法

说明书

本发明公开了重组人永生化角质形成细胞系及其制备方法。重组人永生化角质形成细胞系的制备方法为：向人永生化角质形成细胞导入特异DNA分子，获得重组人永生化角质形成细胞系；所述特异DNA分子从5’末端向3’末端依次包括ARE元件、SV40启动子和编码荧光酶的基因。采用本发明提供的重组人永生化角质形成细胞系可以筛选致敏化合物。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及重组人永生化角质形成细胞系及其制备方法。

背景技术

评价某物质诱发接触性皮炎(皮肤过敏)的可能性是筛选其能否用于消费品和工业产品的新成分的关键。传统上，一般使用动物实验来评价某物质诱发皮肤过敏的可能性，但由于动物与人类种属差异的局限性和动物保护福利要求的日益加强，动物实验已经不能满足要求。动物实验有使用动物量大、耗时长、终点判断主观性强、敏感度低的缺陷。寻找与人类在体实验原理更接近并且高效、灵敏、快捷的体外替代评价方法成为近几年国际上的研究热点。

发明内容

本发明的目的是建立一种用于筛选致敏化合物的细胞系。

本发明首先保护一种制备重组人永生化角质形成细胞系的方法，可为向人永生化角质形成细胞导入特异DNA分子，获得重组人永生化角质形成细胞系；所述特异DNA分子从5’末端向3’末端依次包括抗氧化反应元件、启动子和编码荧光酶的基因。

上述方法中，所述人永生化角质形成细胞可为HaCaT细胞。HaCaT细胞即人永生化角质形成细胞HaCaT细胞。人永生化角质形成细胞HaCaT细胞具体可为北京协和细胞资源中心的产品。

上述方法中，所述特异DNA分子从5’末端向3’末端依次可由所述抗氧化反应元件、所述启动子和所述编码荧光酶的基因组成。

上述方法中，所述抗氧化反应元件可为ARE元件。所述ARE元件的核苷酸序列可如序列表中序列1所示。

上述方法中，所述启动子可为SV40启动子。所述SV40启动子的核苷酸序列可如序列表中序列3所示。

上述方法中，所述荧光酶的氨基酸序列见序列表中序列5。

上述方法中，所述“向人永生化角质形成细胞导入特异DNA分子”可通过向人永生化角质形成细胞导入重组载体实现；所述重组载体含有所述特异DNA分子。

上述方法中，所述重组载体可为将载体pGL4.17的限制性内切酶KpnI和HindⅢ识别序列间的片段替换为序列表中序列2所示的双链DNA分子，得到的重组质粒。

上述任一所述方法制备的重组人永生化角质形成细胞系也属于本发明的保护范围。

上述任一所述重组人永生化角质形成细胞系在筛选致敏化合物中的应用也属于本发明的保护范围。

实验证明，本发明制备的重组人永生化角质形成细胞系可以筛选致敏化合物。采用本发明制备的重组人永生化角质形成细胞系筛选致敏化合物，不仅与人类在体实验原理更接近，并且高效、灵敏、快捷。本发明具有重要的应用价值。

附图说明

图1为重组HaCaT-1对2，4-Dinitrochlorobenzene的诱导值检测和MTT测试结果。

图2为重组HaCaT-1对4-Nitrobenzyl bromide的诱导值检测和MTT测试结果。

图3为重组HaCaT-1对ρ-Benzoquinone的诱导值检测和MTT测试结果。

图4为重组HaCaT-1对2-Mercaptobenzothiazole的诱导值检测和MTT测试结果。

图5为重组HaCaT-1对Cinnamaldehyde的诱导值检测和MTT测试结果。