[发明专利]一种重组菌及其在检测结核分枝杆菌菌株对药物的敏感性中的应用

权利要求书

1.一种构建重组菌的方法，为敲除大肠杆菌中的pncA基因和nadC基因，且提高所述大肠杆菌中碱性磷酸酶基因的表达或活性，得到重组菌；

所述提高大肠杆菌中碱性磷酸酶基因的表达或活性为将碱性磷酸酶基因导入所述大肠杆菌中；

所述pncA基因的核苷酸序列为序列3；

所述nadC基因的核苷酸序列为序列1；

所述碱性磷酸酶基因的核苷酸序列为序列5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述敲除是采用基因组定点编辑或同源重组的方式进行。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述基因组定点编辑为ZFN编辑、TALEN编辑或CRISPR/Cas9编辑；

所述同源重组为λ-red同源重组或sacB基因介导筛选的同源重组或整合质粒介导的同源重组。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述导入是通过表达碱性磷酸酶基因的重组载体导入。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述敲除大肠杆菌基因组中的pncA基因采用λ-red同源重组方式；

或，所述敲除大肠杆菌基因组中的nadC基因采用λ-red同源重组方式；

或，所述表达碱性磷酸酶基因的重组载体为将碱性磷酸酶基因EAP插入表达载体，得到重组质粒。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为E. coli W3110。

7.由权利要求1-6中任一所述的方法制备的重组菌。

8.权利要求7所述重组菌在制备检测待测结核菌是否为耐药菌株产品中的应用；

或权利要求7所述重组菌在制备检测待测结核菌对药物的敏感性产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述药物为利福平、异烟肼、链霉素或乙胺丁醇。