[发明专利]一种脐带血NK细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201910043593.2 | 申请日： | 2019-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN109486759A | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 施琳 | 申请（专利权）人： | 汇麟生物科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 赵丽娜 |
| 地址： | 100176 北京市北京经济技*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脐带血 扩培 基础培养基 培养容器 培养体系 包被 单抗 接种 细胞培养 应用 | ||
1.一种脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
由脐带血分离得到的PBMC细胞接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养，培养体系是在VIVO-15基础培养基的基础上添加以下组分：以培养体系的体积计，FBS 50±2μL/mL，IL-2 500±10IU/mL，IL-12 2.5±0.2ng/mL，IL-15 20±2ng/mL；
培养4-4.5天后，进行扩培，扩培接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养，扩培所用的培养体系是在GT-T581基础培养基的基础上添加以下组分：以培养体系的体积计，FBS 50±2μL/mL，IL-2 500±10IU/mL，IL-7 1ng±0.1ng/mL，IL-12 2.5±0.2ng/mL，IL-1550±2ng/mL，IL-21 2ng±0.2；
所述扩培次数至少一次。
2.根据权利要求1所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，所述包被有CD16单抗的培养容器均采用以下方法制备：
以所述培养面积为25cm2计，加入含有3±1μg的CD16单抗和1±0.2mL的D-PBS，在细胞培养条件下包被3.5h～4.5h。
3.根据权利要求1所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，PBMC细胞培养的密度为0.5×106/mL-2.0×106/mL。
4.根据权利要求1所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，所述脐带血采用Ficoll密度梯度分离提取PBMC细胞。
5.根据权利要求1-4任一项所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，每次扩培的倍数为2-5倍。
6.根据权利要求1-4任一项所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，每次扩培的倍数为2-3倍。
7.根据权利要求1-4任一项所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，所述扩培次数为2-4次。
8.根据权利要求1-4任一项所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，所述扩培次数为3-4次。
9.根据权利要求1-4任一项所述的脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，所述培养体系均以培养面积为25cm2计，培养体系的体积为5-9mL。
10.根据权利要求1-4任一项所述的胎盘血CIK细胞的培养方法，其特征在于，所述扩培每次培养时间为3-3.5天。
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