[发明专利]一种金花茶中黄酮类物质对鼻咽癌作用有效位点的筛选方法

说明书

本发明公开了一种金花茶中黄酮类物质对鼻咽癌作用有效位点的筛选方法，提取金花茶中的黄酮类物质，以作用于体外培养的CNE‑1、CNE‑2、C666‑1等鼻咽癌细胞株为模型，应用激光共聚焦倒置显微镜、荧光标记mRNA差异显示技术、蛋白组学方法及基质辅助飞行时间质谱等技术，发现金花茶提取物中黄酮类物质可抑制鼻咽癌癌细胞增殖、并诱导其凋亡，并定位检测bcl‑2、notch1等基因在鼻咽癌中的表达，从蛋白水平的变化揭示了金花茶中黄酮类物质抑制鼻咽癌活性的有效位点。本发明还可以通过差异表达的蛋白进行深入研究，阐明其作用的机制，同时这些蛋白有可能作为临床上治疗鼻咽癌药物作用的靶分子。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种金花茶中黄酮类物质对鼻咽癌作用有效位点筛选方法，是以作用于体外培养的鼻咽癌细胞株为模型，通过差异显示反转录聚合酶链式反应技术(DDRT-PCR)、蛋白组学方法等技术，观察金花茶提取物中黄酮类物质抑制鼻咽癌细胞增殖、诱导凋亡及蛋白变化水平效果，经数据库检索匹配，筛选出外源性金花茶中黄酮类物质对鼻咽癌作用的有效位点。

背景技术

金花茶属于山茶科、山茶属，是我国八种国家一级保护植物之一，《本草纲目》有载：“山茶产南方……，又有一捻红，千叶红、千叶白等名，或云亦有黄色者”；广西《地方志》亦有记载：“金花茶，常绿灌木，生长在荒山野岭中”，被誉为“植物界大熊猫”、“茶族皇后”。卫生部2010年第9号文件，批准金花茶、酵母β-葡聚糖、雪莲培养物等5种物品为新资源食品。研究发现，金花茶叶和花中富含总黄酮(异黄酮、双黄酮、花色苷及新黄酮类等)、茶多酚，茶多糖、挥发性精油、多种氨基酸等成分。

黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物，包括黄酮、黄烷醇、异黄酮、双氢黄酮、双氢黄酮醇、噢弄、黄烷酮、花色素、查耳酮、色原酮等，现已发现约4000余种黄酮类化合物，主要存在于植物的叶、果实、根、皮中，实验证明其具有广泛的生理和药理活性(包括抗氧化，清除氧自由基、抗病毒、抗癌、抗炎、抗衰老等)，因此对该化合物的研究已成为国内外医药界研究的热门话题(张睿，徐雅琴，时阳.黄酮类化合物提取工艺研究.食品与机械，2003，01，21-22)。