[发明专利]DUSP3基因甲基化检测试剂在制备结直肠癌预后诊断试剂中的应用

说明书

本发明属于本发明属于基因诊断领域，更具体地，本发明涉及一种DUSP3基因检测试剂在制备结直肠癌预后诊断试剂中的应用，以及一种结肠直肠癌预后诊断试剂/试剂盒。本发明研究发现DUSP3基因的甲基化作为代表性标记物，可以区分出具有高复发风险的高甲基化结直肠癌病例。基于独立的训练队列中确定的最佳cutoff值，所有作为二分类变量的基因在训练队列和验证队列中都具有独立预测无病生存的价值。

技术领域

本发明属于基因诊断领域，更具体地，本发明涉及一种DUSP3基因甲基化检测试剂在制备结直肠癌预后诊断试剂中的应用，以及一种结肠直肠癌预后诊断试剂/试剂盒。

背景技术

结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)在世界范围内很常见，并且仍然是导致癌症相关死亡的第三大原因，其中39％的病人出现I-II期疾病。根治为目的的手术是治疗I-II期结直肠癌患者的标准方法。然而，这些病人中手术后致死性疾病复发率为20-25％。一般来说，目前用于早期CRC分层风险的临床病理因素包括T4病变，组织学分化差，肠梗阻，穿孔肿瘤，少于12个的淋巴结切除术。然而，这些风险因素并未明确区分疾病复发风险高或低的患者。因此，需要为当前的风险分层系统增加预后和预测价值，这可以通过使用经过验证的分子标志物来实现。

在许多人类癌症中，随着肿瘤发生发展中异常表观遗传学改变的累积，肿瘤抑制基因的CpG岛高甲基化被用于开发生物标记物，例如WRN，MLH1和CpG岛甲基化表型(CpGisland methylator phenotype，CIMP)。然而，启动子中的CpG岛仅代表甲基化组的一小部分，广泛位于基因体中的CpG open seas在CRC患者中也呈现出显著的广泛变化，但尚未被用于分子标志物。

一些研究已经分析了CRC中的DNA甲基化谱，使用InfiniumHumanMethylation450K(HM450)芯片检测它们潜在的临床相关性。然而，HM450缺乏对CpGopen seas和参考基因的基因体的覆盖，因此该方法筛选分子标志物的价值是有限的。最近发布的Infinium MethylationEPIC(EPIC)芯片，专门针对这些区域设计了新型探针。与HM450芯片相比，EPIC芯片中新增探针绝大多数(占413,745的78.2％)位于CpG open seas。这为筛选出更多具有临床意义的CpG位点提供了有价值的工具。

发明内容

本发明目的在于提供一种结直肠癌肿瘤标记物的甲基化检测试剂在制备结直肠癌预后诊断试剂中的应用。

本发明另一个目的在于提供一种预测结直肠癌复发的分子标志物。

本发明另一个目的在于提供一种结直肠癌预后诊断试剂。

本发明还有一个目的在于提供一种检测DUSP3的基因体甲基化的方法。

本发明的上述目的通过以下技术手段实现：

一方面，本发明提供了基因检测试剂在制备结直肠癌诊断试剂/试剂盒中的应用，所述基因为DUSP3基因。

作为一种可以选择的实施方式，所述基因还包含TLE4基因、KAZN基因中的一种或两种。

作为一种优选的实施方式，所述基因为DUSP3与TLE的组合。

作为一种优选的实施方式，所述的诊断试剂/试剂盒为结直肠癌预后用途的诊断试剂/试剂盒。

本发明还发现，DUSP3基因的高甲基化和RNA表达之间存在正相关。也就是说，作为一种可替选的实施方式，很可能地该基因的低表达也可以用于结直肠癌的预后诊断。

作为一种实施方式，所述的DUSP3基因检测试剂为检测DUSP3基因表达量检测试剂，优选地，为检测DUSP3基因mRNA的表达量的试剂。

作为另一种实施方式，所述的DUSP3基因检测试剂为DUSP3基因甲基化检测试剂。