[发明专利]一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法

权利要求书

1.一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，包括：

步骤一：用PDMS模具在玻璃片表面用PL处理；

步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。

2.根据权利要求1所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，步骤一包括：

步骤1)在硅衬底上光刻SU-8模具；

步骤2)通过脱模剂浸没SU-8模具室温下反应10min，流水清洗并用氮气吹干；

步骤3)使用热板120℃加热5min，105℃加热2h，60℃加热3h，实现SU-8模具表面键合单分子疏水层；

步骤4)使用玻璃棒将10:1比例配置的PDMS溶液混合均匀，再抽真空除干净气泡；

步骤5)将PDMS混合液倒在SU-8模具上，加热实现固化，形成PDMS固化块，该PDMS固化块中心位置形成有一个长方体形状的凹坑；

步骤6)将PDMS固化块切割所需要的尺寸，然后在其长方体凹坑的左右两端分别打一个进样口与出气口；进样口和出气口均与该长方体凹坑相连通，形成沟道，得到PDMS模具；

步骤7)使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片和该PDMS模具；

步骤8)使用氮气吹干玻璃片及该PDMS模具后，使玻璃载体与该PDMS模具贴合，再用夹具将两者机械固定；

步骤9)在进样口加入10μL 0.1％的PL溶液，使之流满所述沟道后在出气口加入10μL0.1％的PL溶液，室温下与玻璃片表面反应2h，清洗干净后得到表面附着有PL的玻璃载体。

3.根据权利要求1-2所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，所述SU-8模具为一长度为12mm，宽度为300μm，厚度为150μm的矩形板。

4.根据权利要求1-2所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，所述夹具包括矩形的上层板和下层板，上层板和下层板的形状和尺寸均相同，上层板和下层板上靠近外周边缘处均对应开设有四个螺栓孔，上层板的中心位置开设有多个圆孔，其中有两个圆孔分别与PDMS模具的进样口和出气口对准的圆孔。

5.根据权利要求1-4所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，圆孔的直径为4mm。

6.根据权利要求1-4所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，所述夹具为玻璃、聚四氟乙烯或亚克力材料制成。

7.根据权利要求1所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，步骤二包括：

步骤(1)在该载体表面加入20μg/ml的cTnI单克隆抗体溶液室温下反应2h，实现cTnI捕获；

步骤(2)清洗后再加入5％牛血清蛋白溶液室温下反应1h；

步骤(3)清洗后再加入不同浓度cTnI溶液室温下反应2h；

步骤(4)清洗后加入20μg/ml cTnI多克隆抗体溶液室温下反应2h；

步骤(5)清洗后加入2μg/ml荧光标记的兔抗山羊IgG溶液室温下反应1h；

步骤(6)清洗干净后，在荧光显微镜下测得各浓度cTnI对应的荧光强度，得到荧光免疫曲线，并与未经过化学处理的干净玻璃片进行对比。

8.根据权利要求1-7所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，在步骤(3)中，cTnI溶液的浓度范围为1pg/ml-1μg/ml。

9.根据权利要求1-8所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，所述室温的温度范围为22℃～26℃。