[发明专利]一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法

说明书

本发明涉及一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，包括：步骤一：在硅衬底上光刻SU‑8模具；将PDMS溶液混合均匀，抽真空除干净气泡；将PDMS混合液倒在SU‑8模具上，加热固化，形成PDMS固化块，该PDMS固化块中心位置形成有凹坑；在凹坑的左右两端分别打一个进样口与出气口；进样口和出气口均与凹坑相连通；清洗玻璃片和该PDMS模具后，使玻璃载体与该PDMS模具贴合，用夹具将两者固定；在进样口、出气口加入PL溶液，清洗后得到表面附着有PL的玻璃载体；步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。本发明操作简易且成本低廉，通过PDMS模具实现了固相载体特定区域的化学处理，实现荧光增强，大大提高了蛋白质芯片的检测灵敏度，对疾病的早期检测与诊断具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法。

背景技术

蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，以及DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用、筛选药物作用的蛋白靶点等。传统的蛋白质芯片检测分析操作一般是对固相载体整体进行特殊的化学处理，再将已知的蛋白分子固定其上捕获能与之特异性结合的待测蛋白从而实现生物分子检测与分析，为抗原抗体检测和药物筛选等领域提供有力的技术支持。然而，传统蛋白质芯片固相载体检测区域大，捕获不均匀且蛋白质浓度较低时荧光检测信号很弱，蛋白质芯片的检测灵敏度低。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种可避免出现上述技术缺陷的在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供的技术方案如下：

一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，包括：

步骤一：用PDMS模具在玻璃片表面用PL处理；

步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。

进一步地，步骤一包括：

步骤1)使用光刻技术在硅衬底上光刻SU-8模具；

步骤2)通过脱模剂浸没SU-8模具室温下反应10min，流水清洗并用氮气吹干；

步骤3)使用热板120℃加热5min，105℃加热2h，60℃加热3h，实现SU-8模具表面键合单分子疏水层；

步骤4)使用玻璃棒将10:1比例配置的PDMS溶液混合均匀，再抽真空1h除干净气泡；

步骤5)将PDMS混合液倒在SU-8模具上，80℃加热1h实现固化，形成PDMS固化块，该PDMS固化块中心位置形成有一个长方体形状的凹坑；

步骤6)将PDMS固化块切割所需要的尺寸，然后在其长方体凹坑的左右两端分别打一个3mm直径的进样口与出气口；进样口和出气口均与该长方体凹坑相连通，形成沟道，得到PDMS模具；

步骤7)使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片和该PDMS模具5min；

步骤8)使用氮气吹干玻璃片及该PDMS模具后，使玻璃载体与该PDMS模具贴合，再用夹具将两者机械固定；

步骤9)在进样口加入10μL 0.1％的PL溶液，使之流满所述沟道后在出气口加入10μL0.1％的PL溶液，室温下与玻璃片表面反应2h，清洗干净后得到表面附着有PL的玻璃载体。

进一步地，所述SU-8模具为一长度为12mm，宽度为300μm，厚度为150μm的矩形板。