[发明专利]一种具有杀线杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物及其用途

权利要求书

1.一种具有杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物，其特征在于所述耳霉为暗孢耳霉，采用以下方法制备：

1）耳霉真菌活化；

2）液体摇菌培养：活化的耳霉真菌在23-25℃暗培养4-6天，挑取新鲜菌块加入到萨氏液体培养基中，所述的萨氏液体培养基由质量浓度为2-12%葡萄糖、0.9-1.1%酵母粉、0.9-1.1%蛋白胨制成，新鲜菌块与萨氏液体培养基的重量体积比为1mg：0.8-1.2ml，16-30℃，190-210 rpm转速下摇菌培养1-5天，得到发酵菌液；

3）菌丝细胞破壁：用滤纸过滤发酵菌液后，取菌丝经匀浆机研磨破碎细胞；

4）耳霉胞质可溶性提取物的提取：菌丝破碎细胞中加入磷酸缓冲液，高速离心去除杂质，得上清液即为耳霉胞质可溶性蛋白提取物。

2.如权利要求1所述的一种具有杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物，其特征在于步骤1）中：在加富萨氏培养基上活化耳霉真菌，萨氏培养基中加入体积分数为8-12%纯牛奶，所述的萨氏培养基由质量浓度为3-5%葡萄糖、0.5-1.5%酵母粉、0.5-1.5%蛋白胨制成。

3.如权利要求1所述的一种具有杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物，其特征在于步骤2）中：活化的耳霉真菌在23-25℃暗培养5天。

4.如权利要求1所述的一种具有杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物，其特征在于步骤2）中：16-30℃，190-210 rpm转速下摇菌培养2-4天。

5.如权利要求1所述的一种具有杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物，其特征在于步骤2）中：连续传代培养1-5次，每2-3天转接一次萨氏液体培养基。

6.如权利要求1所述的一种具有杀虫活性的耳霉胞质可溶性提取物在制备杀大蜡螟幼虫和松材线虫制剂中的应用。