[发明专利]五种来源于火殃勒的ent-atisane型二萜类化合物及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及五个新的ent‑atisane二萜类化合物（1‑5）的结构、制备方法及其在抗炎、治疗神经退行性疾病药物中的应用，所述的新化合物1‑5，具有如下结构。本发明的五个新化合物有NO抑制、促进神经轴突生长的活性，可用于抗炎、治疗神经退行性疾病药物的开发和应用。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及火殃勒中新的二萜类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

NO（Nitric oxide）是一重要的信使分子，在各种生理生化过程中，起着关键的作用，具有神奇的生理调节功能。在许多组织中，尽管其真正的释放量目前尚难于检测，但已明确释放不同浓度的NO，且浓度的变化与机体的生理机能紧密相关。许多疾病，包括炎症、神经退行性疾病、癌症等，可能是NO的释放或调节不正常引起的。

炎症反应时，炎症介质或致炎物可诱导或增加局部NO的合成及释放，而NO的释放又可诱导促炎症细胞因子产生，如IL-1、TNF-α等。过量的NO可促进血管扩张，增强血管通透性和渗漏，产生细胞毒性。过多的NO的细胞毒性是非特异性的，不仅针对微生物，而且导致细胞周围组织和细胞损害。鉴于炎症与NO的密切关系，抑制NO的生成，已成为抗炎药物的靶标之一。

在中枢神经系统中，NO是神经炎症反应的一个信号。炎症反应伴随着小胶质细胞的活化，并释放大量的NO，产生神经毒性，导致神经元的退化与死亡，进而引起神经退行性疾病。因此，抑制中枢神经系统NO的产生，在治疗神经炎症的同时，对与神经炎症相关的神经退行性疾病，如阿尔兹海默症、帕金森症等有潜在的治疗作用。

植物为我们提供了结构与生物活性多样性的天然产物。为了寻找新的NO抑制剂、进而开发抗炎、以及治疗神经退行性疾病的药物，我们建立了BV-2细胞筛选模型。此细胞在脂多糖（Lipopolysaccharides, LPS）的刺激下，产生NO；在LPS刺激的同时，加入受试药物（化合物或植物提取物），评价药物抑制NO活性，从而发现抗炎以及治疗神经退行性疾病的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供火殃勒中5个新的二萜类化合物及其制备方法和应用。

本发明提供的新化合物1-5属于ent-atisane型二萜，其结构如图1所示。

本发明还提供了所述新化合物1-5的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）火殃勒（Euphorbia antiquorum L）的茎用溶剂提取，回收提取液得粗提物；

（2）步骤（1）所得粗提物溶解于水中，采用与水不相混溶的有机溶剂萃取，回收溶剂得到萃取物；

（3）步骤（2）所得萃取物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱；

（4）上述步骤（3）中所得流份经MPLC（中压液相色谱, 色谱填料为ODS）分离，以甲醇/水，或乙腈/水混合溶剂为流动相梯度洗脱；

（5）上述步骤（4）中所得流份经HPLC-RI（高效液相-示差检测）色谱分离，以甲醇/水为流动相洗脱，或以乙腈/水为流动相梯度洗脱，得到化合物1-5。本发明提供的新化合物1-5的制备方法，步骤（1）所述的提取方法为加热回流提取或超声提取，所用溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的至少一种，药材：溶剂的重量体积比为1:5～1:15。

本发明提供的新化合物1-5的制备方法，步骤（2）所述的萃取方法，所用有机溶剂为石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中的任意一种，水溶液和有机溶剂体积比1:1-1:2。

本发明提供的新化合物1-5的制备方法，步骤（3）中，洗脱溶剂为石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂，其比例为100:2～100:30。